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Kasumi-6 Thawing急性髓系细胞白血病细胞系

Kasumi-6 Thawing
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上海 更新日期:2024-12-25

上海宾穗生物科技有限公司

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产品详情:

中文名称:
Kasumi-6 Thawing急性髓系细胞白血病细胞系
英文名称:
Kasumi-6 Thawing
保存条件:
低温避光
纯度规格:
1x10(6)viable cells/ml
产品类别:
有机化学品
"Kasumi-6 Thawing急性髓系细胞白血病细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:淋巴母细胞样
Kasumi-6 Thawing急性髓系细胞白血病细胞系
细胞生长:悬浮
细胞传代培养的胰酶消化法:传代培养:是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。传代细胞,可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤:①入无菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒双手;②倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热;③超净台台面应整洁,用75%酒精棉球擦拭清洁;④打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右,关闭紫外灯,打开风机清洁空气除去臭氧;⑤点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内;⑥将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上;⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去残留的就培养基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每个大培养瓶加入1ml胰酶,小培养瓶用量酌减,盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鲜培养基,反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液,然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖,适度拧紧后稍回转,以利于CO2的进入,将培养瓶放回CO2培养箱;⑩对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:每周2-3次。
可以这样说,对于需要消化传代的细胞,每一次的消化都是对这个细胞存活与否,状态好与不好至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题,自己养的细胞开始的几代长的还挺好的,可是穿过几代之后就发现自己的细胞不行了,状态越来越差劲了。对于这个问题,可以非常肯定地说,你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以,越长越差。在消化的过程中,你加入胰酶后,所有细胞都在被胰酶消化着,但是我们忽视了一个问题就是,细胞的生长状态是不一样的,每一个细胞的贴壁情况也是不一样的,有的贴壁牢固,有的贴壁没有那么牢固的,所以,让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的,他们受到了差别待遇当然会有脾气的,大家争取做到因材施教,比如试试下面的“四步消化法”。(以难消化细胞为例),具体操作:1)首先不加胰酶,倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍(目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉)。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍,这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍,两次所得悬液混合传入新瓶。(你可以将这些传入新瓶培养,以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了)3)吸干净瓶内剩余液体,加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍,吸掉弃之,再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察,待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶,加入新培养基开始吹打,吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。(也可以传入新瓶培养,以与后面及前面的做对比)4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶,如果你们那比较富裕的话,继续镜下观察,待剩余细胞间隙明显,细胞独立开来的时候,吸掉胰酶,加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养(根据实际情况把握)。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
Kasumi-6 Thawing急性髓系细胞白血病细胞系
细胞生长特性:悬浮生长
细胞消化过程总结:其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性,无论死活的细胞都是如此,你可以尝试,准备100%的单个细胞悬液,贴壁后观察细胞,仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此,容易聚集,不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑,这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误,以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来,这个时候即使是成片的(比如Calu-3细胞),吹打不超过20次后(一般10次即可),成小规模聚集(10个细胞左右),是正常的,不要试图再去延长消化时间,或者像有的同学那样吹打1h,等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞(润洗方法5min还不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足够了,一般我加300ul。即使这样难消化的细胞,一般不超过5min,即可见细胞成片移动,就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候,比如tsDC细胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙状移动。
细胞形态特性:成髓细胞
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Kasumi-6 Thawing急性髓系细胞白血病细胞系
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成立日期 (7年)
注册资本 635万元人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 500万-1000万
经营模式 试剂
主营行业 通用试剂,高纯试剂,催化试剂,基础无机试剂

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