"KGN Thawing人卵巢颗粒细胞系
细胞背景资料:该细胞株是颗粒细胞瘤。细胞在加入人体绒膜促性腺激素后可能产生孕酮。细胞生长缓慢。
细胞形态:上皮细胞样
KGN Thawing人卵巢颗粒细胞系
细胞生长:贴壁
细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
KGN Thawing人卵巢颗粒细胞系
细胞生长特性:贴壁
血清必须贮存于–20~-70℃,若存放于4℃,请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶,可将40~45ml分装于无菌50ml离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。勿将血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏,而影响血清之品质。血清凝絮物:发生之原因有许多种,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin) 造成,这些凝絮沈淀物不会影响血清本身之品质。若欲减少这些凝絮沈淀物,可用离心3000rpm,5min去除,或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沈淀物,因为会阻塞过滤膜。显微镜下观察之“小黑点”:通常经过热处理之血清,沈淀物的形成会显著的增多。有些沈淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为血清遭受污染,而将血清放在37℃中欲培养此“微生物”,但在37℃环境下,又会使此沈淀物增多,更会误认为微生物之增殖,但以培养细菌之培养基检测,又没有污染。一般而言,此小黑点应不会影响细胞之生长,但若怀疑此血清之品质,应立即停用,更换另一批号的血清。
细胞形态特性:上皮细胞样
SK-RC-52细胞系相关产品:SC细胞、H4IIE细胞、HT 1080.T细胞
RPMI 8402细胞系相关产品:Hs-611-T细胞、AML-2细胞、HT-1197细胞
WC00059细胞系相关产品:GM01232细胞、LTEPa2细胞、NCI H157细胞
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RH35细胞系相关产品:Hs606T细胞、SK-N-BE(2)C细胞、HCE-T细胞
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RBL-1细胞系相关产品:RBVEC细胞、Hs 604.T细胞、GM00215细胞
RBE4细胞系相关产品:B95-8细胞、MCF-12F细胞、NCIH522细胞
GM07404A细胞系相关产品:SNU407细胞、HTori-3细胞、CTLL(2)细胞
CORL26细胞系相关产品:WM-239A细胞、KMS11细胞、MDAPC2B细胞
MAEC细胞系相关产品:NCIH820细胞、TF1细胞、RBL细胞
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Det 562细胞系相关产品:Loucy细胞、G402细胞、NCI-H1882细胞
TCC Sup细胞系相关产品:Hs 695.T细胞、NCI H226细胞、IGR.OV1细胞
ES-2细胞系相关产品:OCI/AML-2细胞、H-2135细胞、GM 2132细胞
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LED-WiDr细胞系相关产品:SVOG细胞、H1404细胞、ARO-81细胞
C4I细胞系相关产品:V 79-4细胞、SL-1细胞、MUM2B细胞
HBE135-E6E7细胞系相关产品:WERIRb1细胞、NFS 60细胞、GalK1细胞
HEK;293细胞系相关产品:HCC1954 BL细胞、B16/F1细胞、PaTu 8988 S细胞
PASMCS细胞系相关产品:138MG细胞、P3 88 D1细胞、DLD1细胞
3T3 clone A31细胞系相关产品:EC-109细胞、NB-4细胞、BDCM细胞
CW2细胞系相关产品:Epstein-Barr-2细胞、MJ细胞、HS 683T细胞
KGN Thawing人卵巢颗粒细胞系
MCA-205细胞系相关产品:HEK-293 c18细胞、NCI-SNU-1040细胞、Nb2a细胞
NCIH1341细胞系相关产品:L5178-R细胞、WRL68细胞、HCC-827细胞
Sp2/O-Ag14细胞系相关产品:MUVEC细胞、SJ-RH30细胞、H-87细胞
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KYSE 450细胞系相关产品:Med 283细胞、WM239细胞、SNU354细胞
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S3 HeLa细胞系相关产品:MDA-MB 231细胞、MPVECs细胞、Melan-a细胞
WiDr/S细胞系相关产品:WERI-Rb1细胞、MDCK (NBL-2)细胞、Hs-343-T细胞
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D-341 Med细胞系相关产品:OVCAR8/ADR细胞、EOC-20细胞、HuCC-T1细胞
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huH 1细胞系相关产品:Lewis lung carcinoma细胞、D283 Med细胞、343MG细胞
PC10细胞系相关产品:MIMVEC细胞、BNCL2细胞、NCI-H2106细胞
Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-16细胞系相关产品:EFM19细胞、DHL-2细胞、U937细胞
Factor Dependent Continuous-Paterson 1细胞系相关产品:Capan-1细胞、HIT.T15细胞、MB 157细胞
Hela-Ap-1细胞系相关产品:LC-2/ad细胞、HSKMC细胞、MKN1细胞
WM115F细胞系相关产品:WIL2S细胞、KPL-1细胞、LLC PK1细胞
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SCL1细胞系相关产品:NCTC clone 1469细胞、HTR-8细胞、RWPE1细胞
HCT.116细胞系相关产品:SO-Rb 50细胞、P3-X63-Ag8-653细胞、SHSY-5Y细胞
LS 513细胞系相关产品:H292细胞、Molm14细胞、XuanWei Lung Cancer-05细胞
AR41P细胞系相关产品:SW527细胞、P3/X63/Ag8.653细胞、EC-GI-10细胞
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KGN Thawing人卵巢颗粒细胞系
SRA01/04细胞系相关产品:SUM-149PT细胞、MAEC细胞、Colo-201细胞
MCF-12A细胞系相关产品:LSC-1细胞、SKHEP-1细胞、EB-2细胞
OVCAR5细胞系相关产品:SK-NSH细胞、C3H10T1/2 clone8细胞、H524细胞
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CCD-33Co细胞系相关产品:HMC细胞、SKNEP-1细胞、SBC3细胞
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