"COLO 320DM Thawing人结直肠腺癌细胞系
细胞背景资料:该细胞可产生5-羟色胺、去甲、、ACTH和甲状旁腺素。角蛋白、波形蛋白弱阳性。培养条件: RPMI 1640 10%FBS
细胞形态:上皮细胞样
COLO 320DM Thawing人结直肠腺癌细胞系
细胞生长:贴壁
细胞接收后的操作流程与注意事项:1)如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时联系实验室技术人员会跟进解决;2)贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(最高不能超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养;3)生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
贴壁消化难题:1,先用PBS 把细胞洗两遍,使瓶内没有血清了,减少对胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在细胞有些消化下来时,拿着瓶口,运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体,这样细胞很快就下来了,还不需要吹打,分散也均匀;2,成团、絮状:消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象,血清可以终止胰酶的作用,如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清终止,如果消化液中加入了edta的话,就要将消化液倒干净,如果细胞贴壁要求不是很严格的话,一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强,用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基,加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性最强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势),随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验,则不能弃去胰酶),加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代,否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片);消化过度:马上用培养基中和,用吸管吹打细胞,收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清,用全培重悬,换新的培养瓶继续培养,状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落,在换液的时候可以清除掉!
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
COLO 320DM Thawing人结直肠腺癌细胞系
细胞生长特性:悬浮+贴壁
细胞的冻存:为避免污染造成的损失,最小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前,细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基,成分可能如下:包含10%甘油的完全培养基;包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基;50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基或50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基,一些普通的培养基成分可能是:50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存:计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到最小体积,不要搅乱细胞。以1×10(7)到5×10(7)细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×10(7)到1×10(7)在无血清培养基中,再次悬浮细胞。分装进冻存管,将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存:使用分离试剂从基层分离细胞,分离时尽可能温和,使对细胞的损伤减少到最小。在完全生长培养基中,再次悬浮分离细胞,确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积,不要搅乱细胞。以5×10(6)到1×10(6)细胞/ml密度,在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管,将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。
细胞形态特性:淋巴细胞
HKF细胞系相关产品:H-157细胞、OV1063细胞、NCIH520细胞
SKNO1细胞系相关产品:MDA-MB-175VII细胞、HCC-1937细胞、CT26细胞
MOPC细胞系相关产品:HS-294细胞、GM3570细胞、C57 Mouse Tumor 64细胞
U-343MG细胞系相关产品:NCI-SNU-601细胞、SW480E细胞、DB细胞
GM06141细胞系相关产品:RBL-I细胞、THP 1细胞、NCI N87细胞
H19-7细胞系相关产品:GM07404细胞、OCI AML2细胞、SCL-II细胞
FRO81-2细胞系相关产品:RIN-m细胞、SW1088细胞、NCI-H196细胞
Caco-2细胞系相关产品:M-1 myeloid leukemia细胞、HLF细胞、J774细胞
GM02132C细胞系相关产品:HR-8348细胞、GLC82细胞、MC57G细胞
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Hos TE-85细胞系相关产品:MS1细胞、H650细胞、ACC3细胞
NCIH1437细胞系相关产品:H1385细胞、Madison lung细胞、PL11细胞
Sf-21细胞系相关产品:KAT5细胞、MiaPaca.2细胞、PC10细胞
High5细胞系相关产品:C2BBe 1细胞、Kit225 K6细胞、BrCL15细胞
H460细胞系相关产品:Karpas 299细胞、CCD1112Sk细胞、C2C12细胞
MRC-V细胞系相关产品:Human Pancreatic Duct Epithelial细胞、NTera 2/cl.D1细胞、MX1细胞
CL 1-0细胞系相关产品:HFT-8810细胞、U373-MG细胞、NCI-H292细胞
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Hs 895 T细胞系相关产品:CP-70细胞、THP-1细胞、MLTC-1细胞
MMAc.SF细胞系相关产品:PIEC细胞、NCIH2452细胞、CDC/EU.HMEC-1细胞
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KNS42细胞系相关产品:MV4II细胞、HCC0095细胞、NCI-H526细胞
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COLO 320DM Thawing人结直肠腺癌细胞系
H-2591细胞系相关产品:HTori-3细胞、A549细胞、CCRF CEM细胞
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JROECL19细胞系相关产品:LC1/Sq细胞、U118细胞、BT483细胞
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SK-MEL3细胞系相关产品:D283MED细胞、MDA-MB231细胞、PaTu 8988s细胞
CCRF/CEM-C7细胞系相关产品:SLMT-1细胞、COLO206细胞、SCCVII/St细胞
HEK-293-F细胞系相关产品:201T细胞、NCI-H1048细胞、STO细胞
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COLO 320DM Thawing人结直肠腺癌细胞系
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