"NCI-H2085 Thawing人肺癌细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:上皮细胞样
NCI-H2085 Thawing人肺癌细胞系
细胞生长:贴壁
解冻细胞出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下:1)冷冻时细胞密度过低:推荐的解决方案:缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后,立即将冻存管浸入在37℃的水浴中,并震荡至全部融化,然后迅速地转移到预热的培养基中;2)不适当的冷冻过程:推荐的解决方案:解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术,并确保使用了适量和适合的冷冻液。出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下:1)培养瓶的大小:一般解决方案是一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中,使细胞密度上升;如,根据培养基的体积,从T75培养瓶转移到2或3个T25培养瓶中;2)细胞密度过低:通常解决方案是提高未来冷冻物种细胞的冻存密度,或使用较小的培养容器,或解冻多个试管来进行培养。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:3-1:6传代
悬浮细胞不容易转染:悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次,脂质体试剂的毒性较大,这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外,悬浮细胞不易培养,易死亡,也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率,可以使用非脂质体的转染试剂,如纳米材料的。也可以使用电转染方法,针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的,电击对细胞有一定的损伤,选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂,可以将电击对细胞的伤害降到最低,悬浮细胞不易转染,选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
NCI-H2085 Thawing人肺癌细胞系
细胞生长特性:贴壁生长
常规的细胞实验(增殖,凋亡,迁移,分化之类的),受消化影响不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验,比如病毒包装,对细胞代数,对细胞状态要求极高。这个时候,胰酶消化,就是润洗,都会对细胞包装病毒的能力有影响,传代次数一多,细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化,用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性,来使得细胞脱离基质附着表面,但不切割任何蛋白;EDTA的作用。许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白,trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法;PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲,对于一些难消化细胞,那么可以配制不含Ca,Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞,不需要配制如此溶液。
细胞形态特性:上皮细胞
UCLA RO-81-A-1细胞系相关产品:293 EBNA细胞、Molm 13细胞、SUDHL8细胞
H441细胞系相关产品:HHL5细胞、H748细胞、MNNG/HOS Clone F-5细胞
SW 1463细胞系相关产品:HCC202细胞、H-345细胞、GT38细胞
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NCI-H2085 Thawing人肺癌细胞系
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