"WI-38 fibroblast cells人胚肺成纤维细胞系
细胞背景资料:LeonardHayflick建系;有限传代细胞系;寿命为50±10代(倍增时间24h);来自妊娠3个月的正常胚胎肺组织。该细胞系是个用于人制备的人二倍体细胞;培养基中添加TNFα可以加快细胞生长。
细胞形态:成纤维细胞样
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。
HCO细胞系相关产品:SNU368细胞、Wien 133细胞、SJSA-1细胞
A.704细胞系相关产品:HEK293-EBNA细胞、16HBE140细胞、HSC-2细胞
Japanese Tissue Culture-28细胞系相关产品:HuH-28细胞、Pa18C细胞、Molm14细胞
细胞生长:贴壁
WI-38 fibroblast cells人胚肺成纤维细胞系
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞复苏基本方法:1.从液氮罐中取出安剖;有时因安剖未封严,浸入了液氮,取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上盖并不时摇动,尽快解冻。3.剪开纱布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液,装入离心管中,再补加10ml培养液,吹打使细胞悬浮。4.低速离心(500~1000转/分)5分钟,取上清后再重复用培养液漂洗、离心。5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。收到T25 flask细胞时,处理方式为:在寄送过程中,为避免起泡造成细胞脱落死亡,T25 flask均加满培养基。请检查flask外观,并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象,若有任何问题,不要打开盖子,请立即通知细胞实验室。将原封之T25 flask静置于37°C,5%CO2培养箱中,使细胞回温至37°C,并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后,于无菌操作箱内取出flask内之培养基(取出之培养基可以再使用),仅留约5-10ml培养基于flask内,依一般培养方式再将细胞置入培养箱中,或细胞已长满盘,则将细胞做传代培养。
细胞传代方法:1:2-1:4传代;2-3天换液1次
NL20细胞系相关产品:RIN m5F细胞、MLFC细胞、LTEP-sm 1细胞
H647细胞系相关产品:DMS-273细胞、FRhK4细胞、Reuber-H-35 hepatoma细胞
A 375细胞系相关产品:Hs 746T细胞、MCF-7/ADR细胞、451Lu细胞
H-1436细胞系相关产品:PNT1/A细胞、SUM-52-PE细胞、Hca-F细胞
GBC-SD细胞系相关产品:Alexander细胞、Hx-147细胞、PL5细胞
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
WI-38 fibroblast cells人胚肺成纤维细胞系
细胞生长特性:贴壁生长
细胞形态特性:成纤维细胞样
细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
HuT-78细胞系相关产品:LLC-PK1细胞、University of Arizona Cell Culture-812细胞、LS-513细胞
WM 2664细胞系相关产品:TE-9细胞、SK-MEL24细胞、MV411细胞
Bac1 2F5细胞系相关产品:X63Ag8.653细胞、PanC1细胞、Hu-P-T4细胞
Panc-813细胞系相关产品:IA-LM细胞、PCI:SG-231细胞、OE-19细胞
Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma细胞系相关产品:U251细胞、SNU1040细胞、MLFC细胞
FRTL 5细胞系相关产品:RAW264细胞、OCI/AML-5细胞、NS1-Ag 4/1细胞
rRMECs细胞系相关产品:NEC-8细胞、751-NA细胞、U 937细胞
PANC0327细胞系相关产品:3T3 L1细胞、EU-2细胞、Granta-519细胞
NCI-BL6细胞系相关产品:HEC251细胞、TE15细胞、BJ1细胞
JROECL 21细胞系相关产品:KATOIII细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-231细胞、MeT5A细胞
WI-38 fibroblast cells人胚肺成纤维细胞系
I90细胞系相关产品:MES 13细胞、SW1463细胞、INS-1细胞
SK UT 1细胞系相关产品:SNU216细胞、HD11细胞、MN60细胞
Hs606细胞系相关产品:JHH7细胞、HDMEC细胞、Panc 8.13细胞
Pa18C细胞系相关产品:HS-766T细胞、BSC40细胞、NCI-441细胞
SVGp12细胞系相关产品:H-2066细胞、SW-1573细胞、TE354T细胞
H-2073细胞系相关产品:Sf21细胞、KMB17细胞、Huh-7细胞
H-2073细胞系相关产品:Sf21细胞、KMB17细胞、Huh-7细胞
RT-BM-1细胞系相关产品:HUC-1细胞、HCC1806细胞、GM 2132细胞
NCI-H2110细胞系相关产品:E6-1细胞、G-292 clone A141B1细胞、Fukuoka University-Malignant mixed Mullerian Tumor-1细胞
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CHP 100细胞系相关产品:PANC3.27细胞、RWPE-1细胞、Hs-611-T细胞
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V-79细胞系相关产品:NCI-SNU-5细胞、H9细胞、SKM1细胞
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MDA MB 175 VII细胞系相关产品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-5细胞、H-1623细胞、TO 175.T细胞
Fu97细胞系相关产品:KRC/Y细胞、T 84细胞、LN 229细胞
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OK-WT细胞系相关产品:BBE细胞、AML-193细胞、PLA-801C细胞
RPMC细胞系相关产品:RA-FLSs细胞、NeHepLxHT细胞、H2286细胞
U14细胞系相关产品:IFRS1细胞、DR2R 1610细胞、H-1838细胞
HOSEpiC细胞系相关产品:Toledo细胞、Hs-27细胞、P-36细胞
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NCI-H1581细胞系相关产品:ROS1728细胞、NCI-SNU-C2A细胞、GBC-SD细胞
Rat1细胞系相关产品:INS-1细胞、HPaSteC(HPSC)细胞、SW 780细胞
Rat1细胞系相关产品:INS-1细胞、HPaSteC(HPSC)细胞、SW 780细胞
AC16 [Human hybrid]细胞系相关产品:SU86.86细胞、L2细胞、L23/P细胞
T1-73细胞系相关产品:PM6细胞、C12细胞、CL MC/9细胞
EBNA-293细胞系相关产品:SKNBE(1)细胞、QBC(939)细胞、GP5d细胞
CCD18Co细胞系相关产品:HLE B-3细胞、NCI-H1385细胞、HBL 100细胞
ChaGo-K-1细胞系相关产品:Michigan Cancer Foundation-7细胞、LS123细胞、CAKI1细胞
HC-11细胞系相关产品:Hca-F细胞、BT-483细胞、KATO 3细胞
PC 61细胞系相关产品:CCF-STTG1细胞、Huh-7细胞、H-524细胞
HFLS细胞系相关产品:MPC11细胞、HCC-9204细胞、HEM细胞
SUP-M2细胞系相关产品:SW1271细胞、D283MED细胞、Baby Hamster Kidney-21细胞
Lewis Lung细胞系相关产品:WEHI231细胞、UMNSAH/DF#1细胞、LIXC-002细胞
WB-F344细胞系相关产品:NCI-H211细胞、Kit225/K6细胞、WM239A细胞
Molm 13细胞系相关产品:NTERA2-cloneD1细胞、PNT1/A细胞、SK-NSH细胞
WI-38 fibroblast cells人胚肺成纤维细胞系
WERI细胞系相关产品:OV3121细胞、AHH1细胞、HAC-84细胞
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Bac1 2F5细胞系相关产品:X63Ag8.653细胞、COV504细胞、PG-BE1细胞
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