"A-704 Thawing人肾癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
A-704 Thawing人肾癌细胞系
细胞生长：贴壁
体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，最后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：３—１：４传代，每周换液２-３次
在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，客户遇到的问题从细胞生长角度来说，针对细胞培养过程中生长不好、甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不好》可能原因：细胞本身的状态》1)细胞传代次数多，细胞老化；2)细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；3)细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；4)胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未完全分离而成团，细胞死亡；5)细胞的冻存与复苏：慢冻速融。污染：1)支原体污染；2)霉菌污染；培养基或血清：1)更换血清或培养基之前未进行验证；2)选择的培养基是否合适；3)培养基配制是否准确无误；培养环境：1)CO2供应是否正常；2)培养箱或摇床温度控制是否正确；解决方法：根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；2)避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；3)要用合适的血清或培养基，经过验证；4)注意实验室的环境；二、培养细胞死亡》可能原因：1)培养箱内无CO2；2)培养箱内温度波动太大；3)细胞冻存或复苏过程中损伤；4)培养液渗透压不正确；5)培养液中有毒代谢产物堆积；解决方法：1)检测培养箱内CO2；2)检查培养箱内温度；3)取新的保存细胞种；4)检测培养液渗透压；5)换入新鲜培养液。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
A-704 Thawing人肾癌细胞系
细胞生长特性：贴壁生长
细胞传代培养(消化法)标准操作规程【原理】细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。【材料和试剂】１)无菌生理缓冲液(PBS)；２)胰酶-EDTA溶液(０.０５%胰酶-０.５３mM EDTA-４Na): 以１０ml分装于１５ ml无菌离心管中，保存于–２０℃，使用前放在３７℃水槽回温；３)新鲜培养基；４)无菌吸管/离心管/培养瓶【传代前准备操作】１)预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入３７℃水浴锅内预热；２)用７５％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手；３)正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染；４)点燃酒精灯：注意火焰不能太小；５)准备好将要使用的消毒后的空培养瓶；６)取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内；７)从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞；８)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。
细胞形态特性：上皮细胞样
KYSE140细胞系相关产品：H1573细胞、BJ1细胞、H1299细胞
T8细胞系相关产品：Lu-65细胞、SK-SH-SY5Y细胞、RCC23细胞
MT-3 [Human leukocytes]细胞系相关产品：PAMC82细胞、Hs 729T细胞、RPMI 8226/S细胞
293-EBNA细胞系相关产品：Calf Pulmonary Artery Endothelial细胞、NRK49F细胞、CBRH-7919细胞
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NCIH1573细胞系相关产品：CT26细胞、KYSE50细胞、MOVAS细胞
HEC-1-B细胞系相关产品：QBC939细胞、BrCL15细胞、KP-4细胞
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MOLM16细胞系相关产品：16-HBE14o细胞、CEM-CCRF细胞、HSF细胞
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NR-8383细胞系相关产品：SU4细胞、NK92细胞、HFL 1细胞
Suzhou Human Glioma-44细胞系相关产品：52PE细胞、H-157细胞、B16 melanoma F10细胞
NCI-H727细胞系相关产品：T-ALL 1细胞、NCI-H1993细胞、KG-1细胞
A-704 Thawing人肾癌细胞系
OVCAR 4细胞系相关产品：TSCC1细胞、HIEC细胞、NPA-87细胞
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