"BT-483 Thawing人乳腺导管癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
BT-483 Thawing人乳腺导管癌细胞系
细胞生长：贴壁
体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良好(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，最后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代，２—３天换液一次
悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到最低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
BT-483 Thawing人乳腺导管癌细胞系
细胞生长特性：贴壁生长
常规的细胞实验(增殖，凋亡，迁移，分化之类的)，受消化影响不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验，比如病毒包装，对细胞代数，对细胞状态要求极高。这个时候，胰酶消化，就是润洗，都会对细胞包装病毒的能力有影响，传代次数一多，细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化，用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性，来使得细胞脱离基质附着表面，但不切割任何蛋白；EDTA的作用。许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白，trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca离子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA，就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果１０min还消化不彻底的话)，而应该想其它办法；PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲，对于一些难消化细胞，那么可以配制不含Ca，Mg离子的PBS，因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞，不需要配制如此溶液。
细胞形态特性：上皮细胞样
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BT-483 Thawing人乳腺导管癌细胞系
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