"DBTRG-05MG Thawing人脑胶质母细胞瘤细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:上皮细胞样
DBTRG-05MG Thawing人脑胶质母细胞瘤细胞系
细胞生长:贴壁
【细胞培养中原虫的污染情况总结】原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗(酸链霉素和苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。1)孵箱应定期用三氧机消毒或者紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水;2)超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素;3)超净台的风机不能过大,风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染;4)无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的喷洒中和,约几小时即可进入操作。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:4-1:6传代;每周换液2-3次。
悬浮细胞不容易转染:悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍,所以,脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次,脂质体试剂的毒性较大,这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外,悬浮细胞不易培养,易死亡,也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率,可以使用非脂质体的转染试剂,如纳米材料的。也可以使用电转染方法,针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的,电击对细胞有一定的损伤,选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂,可以将电击对细胞的伤害降到最低,悬浮细胞不易转染,选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
DBTRG-05MG Thawing人脑胶质母细胞瘤细胞系
细胞生长特性:贴壁生长
【悬浮型细胞的传代操作】1)吸出细胞培养液,放入离心管中,离心1000rpm 5分钟;2)吸掉上清液,加入适量之新鲜培养基,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。【注意事项】1)严格的无菌操作;2)适度消化:消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。附:EDTA(0.02%四乙酸二钠)消化液配方:EDTA 0.20g,NaCl 8.00g,KCl 0.20g,KH2PO4 0.02g,葡萄糖 2.00g,0.5%红4ml,加入蒸馏水定容至1000ml。10磅20min高压灭菌,使用时调节PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和,使用后培养瓶要彻底清洗,否则再培养时细胞容易脱壁。
细胞形态特性:成纤维细胞
CEM-C1细胞系相关产品:Reuber H35细胞、AG06814-J细胞、Hs 729细胞
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DBTRG-05MG Thawing人脑胶质母细胞瘤细胞系
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CL 1-5细胞系相关产品:PANC-1细胞、H-1563细胞、IBMF-7细胞
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