"BV-2 Thawing小鼠小胶质瘤细胞系
细胞背景资料:源于C57BL/6小鼠小胶质细胞,表达核v-myc、染色体v-raf癌基因,表面表达envgp70抗原,在形态学、表型及功能上有吞噬细胞的特征。
细胞形态:上皮细胞样
BV-2 Thawing小鼠小胶质瘤细胞系
细胞生长:贴壁
【细胞培养中细菌、霉菌的污染情况总结】细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!可在培养液中加相应的抗生素处理;霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,用酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:6传代;2-3天1次。
传代的操作步骤注意事项:1)操作前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。2)点燃酒精灯,操作在火焰附近进行,耐热物品要经常在火焰上烧灼,金属器械烧灼时间不能太长,以免退火,并冷却后才能夹取组织,吸取过营养液的用具不能再烧灼,以免烧焦形成碳膜。3)操作动作要准确敏捷,但又不能太快,以防空气流动,增加污染机会。4)不能用手触已消毒器皿的工作部分,工作台面上用品要布局合理。5)瓶子开口后要尽量保持45℃斜位。6)吸溶液的吸管等不能混用。贴壁细胞传代的操作步骤:1)吸除培养瓶内旧培养液。2)向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。3)置温箱中2-5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。4)吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。5)用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。6)计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。悬浮细胞传代的操作步骤:1)吸出细胞培养液,放入离心管中,离心1000rpm5分钟。2)吸掉上清液,加入适量之新鲜培养基,混和均匀后,依稀释比例转移至新的培养瓶中,以正常培养条件培养。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
BV-2 Thawing小鼠小胶质瘤细胞系
细胞生长特性:半贴壁生长
常规的细胞实验(增殖,凋亡,迁移,分化之类的),受消化影响不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验,比如病毒包装,对细胞代数,对细胞状态要求极高。这个时候,胰酶消化,就是润洗,都会对细胞包装病毒的能力有影响,传代次数一多,细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化,用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性,来使得细胞脱离基质附着表面,但不切割任何蛋白;EDTA的作用。许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白,trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法;PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲,对于一些难消化细胞,那么可以配制不含Ca,Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞,不需要配制如此溶液。
细胞形态特性:多形型
Fetal Rhesus Kidney-4细胞系相关产品:IGR-OV1细胞、HOS TE85细胞、LAN-6细胞
HIT细胞系相关产品:SUM-52细胞、PLA801C细胞、MEL-526细胞
SV40-MES13细胞系相关产品:KRC Y细胞、G519细胞、149 PT细胞
N-9细胞系相关产品:PK15细胞、MSF细胞、CG4细胞
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BV-2 Thawing小鼠小胶质瘤细胞系
SUM-102细胞系相关产品:H-1651细胞、NRK 49F细胞、SKN-AS细胞
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BV-2 Thawing小鼠小胶质瘤细胞系
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LAD-2细胞系相关产品:293FT细胞、PLC-PRF-5细胞、TB1 Lu细胞
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