"PC-9 Thawing人肺腺癌细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:上皮细胞样
PC-9 Thawing人肺腺癌细胞系
细胞生长:贴壁
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代方法:1:2传代
在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题,客户遇到的问题从细胞生长角度来说,针对细胞培养过程中生长不好、甚至死亡的原因,我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞生长不好》可能原因:细胞本身的状态》1)细胞传代次数多,细胞老化;2)细胞的接种量:接种量过低,细胞生长缓慢;3)细胞传代时间过晚:细胞中毒,影响传代后的细胞生长;4)胰酶消化时间过长或过短:时间过长,细胞死亡;时间过短,细胞未完全分离而成团,细胞死亡;5)细胞的冻存与复苏:慢冻速融。污染:1)支原体污染;2)霉菌污染;培养基或血清:1)更换血清或培养基之前未进行验证;2)选择的培养基是否合适;3)培养基配制是否准确无误;培养环境:1)CO2供应是否正常;2)培养箱或摇床温度控制是否正确;解决方法:根据以上四个方面的可能原因,做出针对性的解决方案》1)注意细胞的本身状态:如传代次数、接种量等;2)避免产生污染(用正规、合法、可溯源的血清);3)要用合适的血清或培养基,经过验证;4)注意实验室的环境;二、培养细胞死亡》可能原因:1)培养箱内无CO2;2)培养箱内温度波动太大;3)细胞冻存或复苏过程中损伤;4)培养液渗透压不正确;5)培养液中有毒代谢产物堆积;解决方法:1)检测培养箱内CO2;2)检查培养箱内温度;3)取新的保存细胞种;4)检测培养液渗透压;5)换入新鲜培养液。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
PC-9 Thawing人肺腺癌细胞系
细胞生长特性:贴壁生长
常规的细胞实验(增殖,凋亡,迁移,分化之类的),受消化影响不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验,比如病毒包装,对细胞代数,对细胞状态要求极高。这个时候,胰酶消化,就是润洗,都会对细胞包装病毒的能力有影响,传代次数一多,细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化,用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性,来使得细胞脱离基质附着表面,但不切割任何蛋白;EDTA的作用。许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白,trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法;PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲,对于一些难消化细胞,那么可以配制不含Ca,Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞,不需要配制如此溶液。
细胞形态特性:上皮样
SK LU 1细胞系相关产品:EMT6细胞、LA-N-6(OAN)细胞、NCIH1836细胞
H196细胞系相关产品:WM-2664细胞、HcaF细胞、GM01232细胞
CHO cell clone K1细胞系相关产品:HCC-95细胞、SKNSH细胞、HCC9724细胞
HCT15细胞系相关产品:P-3J细胞、HuT 102细胞、OVCAR 8细胞
OVCAR.8细胞系相关产品:H-446细胞、HCM细胞、IPLB-Sf21AE细胞
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C3H10T1/2细胞系相关产品:NCIH1573细胞、PCI-04B细胞、HCEpiC细胞
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COC1/CDDP细胞系相关产品:UCLA RO-81A-1细胞、IFRS1细胞、DHL-6细胞
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MDA-MB-175VII细胞系相关产品:H-2108细胞、SF767细胞、BNL-HCC细胞
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PC-9 Thawing人肺腺癌细胞系
JROECL21细胞系相关产品:OsA-CL细胞、HCMEC(BL12-H)细胞、EBC-1/original细胞
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PC-9 Thawing人肺腺癌细胞系
KYSE 520细胞系相关产品:H2122细胞、RC-4B/C细胞、NCIH889细胞
H-1819细胞系相关产品:5637细胞、SKNDZ细胞、OCI-Ly3细胞
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