HFL-I Adherent人胚肺成纤维细胞系

"HFL-I Adherent人胚肺成纤维细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：成纤维细胞样
传代24h-48h处于对数期的细胞，在冻存前24h换液；按照常规方法消化，离心，收集细胞沉淀；用血清重悬细胞沉淀，用血球计数板或者细胞计数仪进行细胞计数；配制细胞冻存液，将冻存液加到细胞液中，吹打混匀，控制细胞密度为2×10(6)-5×10(6)/ml；将细胞悬液按照1ml/支分装至已标记好的冻存管中，旋紧管盖；将冻存管放入程序冻存盒中，冻存盒立即移至-80°C冰箱中，过夜后将冻存细胞移至液氮中长期保存。冻存管内细胞数目一般不低于2x10(6)cells/ml/vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml/vial为宜。细胞冻存和复苏遵循“慢冻快溶”的原则。取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。细胞冻存时细胞状态不佳，会严重影响复苏时细胞的活率。一般选择处于对数生长期的细胞进行冻存，冻存前一天细胞进行换液；消化过度也会严重影响细胞冻存后复苏的活率；冻存细胞时为按照温度梯度进行操作，会严重影响细胞活率。
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
HFL-I Adherent人胚肺成纤维细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
DMS-273细胞系相关产品：Hs840_T细胞、2780细胞、201T细胞
MGHU1细胞系相关产品：WM2664细胞、MDA-MB-415细胞、RC-K8细胞
STC-1细胞系相关产品：Tu-686细胞、P3-NS1/1Ag 4.1细胞、NIH/3T3细胞
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
hRMECs细胞系相关产品：HSAS4细胞、LSECs细胞、NCI-H1672细胞
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P388D1细胞系相关产品：MCF7ADR细胞、LTEP-sm细胞、HCC-70细胞
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
HFL-I Adherent人胚肺成纤维细胞系
细胞形态特性：详见细胞说明书
细胞培养常见问题及解决方案:１)培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞极大可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决；２)细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以离心去掉，留１０ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度８０%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决；３)对于生长缓慢的贴壁细胞：可采用适当的提高培养基中血清浓度，或隔日换液的方法来保证细胞的状态和生长速度；４)对于生长不均的贴壁细胞：在培养过程中若出现细胞分布明显不均时(即某一区域细胞已重叠生长，而旁边则为一块空白)，此时可将细胞进行消化，重新打散，贴壁，加入新培养基进行培养。
SK-Col-1细胞系相关产品：H-1838细胞、NIE-115细胞、TYK-nu细胞
HO1-N-1细胞系相关产品：143TK-细胞、NCIH847细胞、YD15细胞
hTERT RPE-1细胞系相关产品：QGY-7703细胞、CCRFCEM细胞、G519细胞
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HFL-I Adherent人胚肺成纤维细胞系
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