KMST-6 Adherent人胚成纤维细胞系

"KMST-6 Adherent人胚成纤维细胞系
细胞背景资料：胚成纤维细胞；女性
细胞形态：成纤维细胞样
贴壁细胞传代：去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代：一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 室温离心5min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培养液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
KMST-6 Adherent人胚成纤维细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞培养方面注意的几点：无菌意识要强：实验进行前，超净台以紫外灯照射３０分钟灭菌，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面，并开启超净工作台风扇运转数分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以７０%ethanol擦拭无菌操作抬面。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以７０%乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约４５°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。瓶装血清一定要逐步解冻:４℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–２０℃直接至３７℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。热灭活是指５６℃，３０分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到５６℃后，将血清放入，待温度升高到５６℃后计时，一般５分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
H1792细胞系相关产品：IM9细胞、Caco-2BBe细胞、MRC-V细胞
H1341细胞系相关产品：T47D:A细胞、TE354.T细胞、H-1666细胞
Panc4.03细胞系相关产品：RMG-1细胞、EB2细胞、Melanoma 14细胞
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
KTC-1细胞系相关产品：RPMI 8226细胞、UMC11细胞、A 375细胞
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HEK-293 c18细胞系相关产品：brain-derived Endothelial cells.3细胞、Caki2细胞、GES-1细胞
细胞生长特性：贴壁
KMST-6 Adherent人胚成纤维细胞系
细胞形态特性：详见细胞说明书
以下对初次培养细胞人员来说，是非常好的开门教程：准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台；配液室的设备：扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)；培养室的设备：液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-８０℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)；必须放在无菌间的设备：离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO２孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、４℃冰箱(放置serum和培养用液)。无菌室的灭菌：定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用３‰来苏尔或者新洁尔灭或者０.５％擦拭；CO２孵箱(培养箱)灭菌：先用３‰新洁尔灭擦拭，然后用７５％酒精擦拭或者０.５％，再用紫外灯照射；实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各２０-３０分钟；实验后灭菌：用７５％酒精(３‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台；实验人员的无菌准备：肥皂洗手、穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋、用７５％酒精棉球擦净双手。
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SSP-25细胞系相关产品：NIH 3T3细胞、MDCK细胞、MCF10-A细胞
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KMST-6 Adherent人胚成纤维细胞系
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