CCD-18Co Adherent正常人结肠成纤维细胞系

"CCD-18Co Adherent正常人结肠成纤维细胞系
细胞背景资料：结肠；成纤维细胞；女性
细胞形态：成纤维细胞样
传代24h-48h处于对数期的细胞，在冻存前24h换液；按照常规方法消化，离心，收集细胞沉淀；用血清重悬细胞沉淀，用血球计数板或者细胞计数仪进行细胞计数；配制细胞冻存液，将冻存液加到细胞液中，吹打混匀，控制细胞密度为2×10(6)-5×10(6)/ml；将细胞悬液按照1ml/支分装至已标记好的冻存管中，旋紧管盖；将冻存管放入程序冻存盒中，冻存盒立即移至-80°C冰箱中，过夜后将冻存细胞移至液氮中长期保存。冻存管内细胞数目一般不低于2x10(6)cells/ml/vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml/vial为宜。细胞冻存和复苏遵循“慢冻快溶”的原则。取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。细胞冻存时细胞状态不佳，会严重影响复苏时细胞的活率。一般选择处于对数生长期的细胞进行冻存，冻存前一天细胞进行换液；消化过度也会严重影响细胞冻存后复苏的活率；冻存细胞时为按照温度梯度进行操作，会严重影响细胞活率。
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
CCD-18Co Adherent正常人结肠成纤维细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。
MH-S细胞系相关产品：Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-1细胞、PC12(高分化)细胞、KE39细胞
HEK-AD293细胞系相关产品：KASUMI1细胞、ROS1728细胞、LA-N-5细胞
KMS11细胞系相关产品：B 95-8细胞、HCA-7细胞、RBMEC细胞
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
THP1细胞系相关产品：HBVP细胞、WM115-mel细胞、MUTZ3细胞
SW756细胞系相关产品：UCLA-SO-M14细胞、7860细胞、CAL120细胞
RPTEC TERT1细胞系相关产品：786O细胞、H2591细胞、CF PAC-1细胞
细胞生长特性：贴壁
CCD-18Co Adherent正常人结肠成纤维细胞系
细胞形态特性：详见细胞说明书
动物细胞实验室必备仪器进行简单介绍：１)CO２培养箱：CO２培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O２浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO２培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要；２)烘箱(干燥箱)：用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到１６０℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至１００℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至１００℃以下后可开门。３)超净工作台/生物安全柜：细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在１００级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。４)液氮罐：为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-１９６℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。５)超低温冰箱：细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般４℃下存放３０min，转放-２０℃ １ hour，再转入-７０至-８０℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-１９６℃)，这时就必须配备一台-８６℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。６)恒温水浴：从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于３７℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。７离心机：细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的分离则需要高速冷冻离心机。除上述仪器外，移液器、高压灭菌锅、倒置显微镜、荧光显微镜也是细胞培养的必备仪器，发酵罐、转瓶机等也常常见于细胞培养实验室。
OV2008细胞系相关产品：NS1-Ag4/1细胞、HRC-99细胞、NCI-H727细胞
Bac12F5细胞系相关产品：RERF-LCMS细胞、WEHI 164细胞、H-28细胞
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