NCI-H64 Adherent人肺癌细胞系

"NCI-H64 Adherent人肺癌细胞系
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞形态：上皮细胞样
贴壁细胞传代：去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA(1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右完全培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6ml，37℃、5%CO2孵箱培养。悬浮细胞传代：一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min 室温离心5min。弃上清，细胞沉淀用完全培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加完全培养液至4-5ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。
细胞生长：贴壁
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H64 Adherent人肺癌细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
购买细胞注意事项：１)收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系；２)仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等；３)用７５%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次；４)建议客户收到细胞后前３天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和公司技术部沟通交流。【细胞传代操作步骤】一、贴壁细胞传代：１)提前将培养基、PBS放入３７℃水浴锅内预热，用７５%酒精擦拭后再放入超净台内；２)吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液，加少量PBS润洗细胞；３)加入适量胰酶，使胰酶的量能盖住细胞，３７℃孵育，每隔２~３min显微镜下观察，待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶，加入新鲜培养基，晃动细胞瓶，终止胰酶作用；４)用吸管小心吹打贴壁的细胞，制成细胞悬液。控制吹打的力度，避免产生大量的气泡；５)将细胞悬液分别接种到另外的２~３个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置３７℃温箱培养，隔天观察贴壁生长情况。二、悬浮细胞传代：１)将细胞悬液转移到无菌离心管内，１０００rpm离心５min；２)弃去上清，加入新鲜的培养基，用吸管小心吹散沉淀，制成细胞悬液；３)将细胞悬液分别接种到另外的２~３个细胞瓶内，加入新鲜培养基，置３７℃温箱培养。
ABC1细胞系相关产品：Hs-852-T细胞、Sci-1细胞、R1800[RA]细胞
Vx2细胞系相关产品：697细胞、NCIH2196细胞、Psi-2 DAP细胞
SNU-620细胞系相关产品：DoHH2细胞、NPC-TW01细胞、NCIH1435细胞
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
tdott细胞系相关产品：PANC0813细胞、PC-3M-2B4细胞、U-2932细胞
NCTC1469细胞系相关产品：SkChA1细胞、RL952细胞、Madison 109细胞
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细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
NCI-H64 Adherent人肺癌细胞系
细胞形态特性：详见细胞说明书
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。传代细胞培养操作步骤：１)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；２)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；３)置３７℃孵箱或室温(２５℃温度)下进行消化，２-５min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；４)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；５)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；６)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO２培养箱中进行培养；７)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般２-３d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
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