"CAL-78 Adherent人软骨肉瘤细胞系
细胞背景资料:软骨肉瘤;男性
细胞形态:上皮细胞样
细胞传代后放入培养箱没有摇匀,或者放入时摇匀,但在细胞贴壁前,又移动了培养瓶,频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少,培养箱搁板表面不平整,这些因素会导致细胞生长不均匀。研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。运输过程对细胞有严重影响。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C 太久。一些悬浮细胞抱团生长是正常现象,大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下,很可能会出现部分细胞抱团生长的现象,聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物,殃及周围的悬浮细胞,因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。如果出现了细胞团,可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团,也可以尝试一下方法:将细胞悬液收集到15ml离心管中,静置20min左右,小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。部分细胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐药株等),这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡,则很可能是细胞状态不佳,可以通过调整血清浓度,控制消化,控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态;如果大部分细胞出现空泡,且单个细胞内空泡数目偏多,则可能细胞代次较高,细胞老化所致,需更换代次较早的细胞。
细胞生长:贴壁
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
CAL-78 Adherent人软骨肉瘤细胞系
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
细胞传代培养的胰酶消化法:传代培养:是指细胞从一个培养瓶以1:2或1:2以上的比例转移,接种到另一培养瓶的培养。传代细胞,可根据不同细胞采取不同的方法进行细胞传代。贴壁生长的细胞用消化法传代,部分贴壁的细胞用直接吹打或用硅胶软刮的刮除法传代。悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代,或用自然沉降法加入新培养基后再吹打分散进行传代。实验步骤:①入无菌室之前用肥皂洗手,再用75% 的酒精擦拭消毒双手;②倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液37℃下预热;③超净台台面应整洁,用75%酒精棉球擦拭清洁;④打开超净工作台的紫外灯照射台面20min左右,关闭紫外灯,打开风机清洁空气除去臭氧;⑤点燃酒精灯;取出无菌试管,巴士德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内;⑥将培养用液瓶口用75%酒精消毒,过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上;⑦倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3ml Hanks液洗去残留的就培养基,或用少量胰酶涮洗一下;⑧每个大培养瓶加入1ml胰酶,小培养瓶用量酌减,盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察。当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶,使细胞脱离胰酶,然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中;⑨加入少量的含血清的新鲜培养基,反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散,再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7-10ml/大瓶;3-5ml/小瓶)制成细胞悬液,然后分装到新培养瓶中。盖好瓶盖,适度拧紧后稍回转,以利于CO2的进入,将培养瓶放回CO2培养箱;⑩对悬浮培养细胞,步骤7-9不做。直接将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清,加入新鲜培养基,然后分装到各瓶中。
HEM细胞系相关产品:SW 1116细胞、KASUMI6细胞、NCI-446细胞
SK-N-FI细胞系相关产品:Tb 1 Lu细胞、P3/X63/Ag8细胞、MCF 10A细胞
LM6细胞系相关产品:NFS 60细胞、NCI-H735细胞、P30-OHKUBO细胞
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
MDA MB 436细胞系相关产品:U266-B1细胞、EAC-E2G8细胞、KM12-SM细胞
Bac 1.2F5细胞系相关产品:130-T细胞、K422细胞、NTERA-2cl.D1细胞
LU165细胞系相关产品:WIL2-S细胞、hMSC-BM细胞、HCT 116细胞
细胞生长特性:贴壁
CAL-78 Adherent人软骨肉瘤细胞系
细胞形态特性:详见细胞说明书
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下:1)不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子,觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑?知道为什么吗?烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候,炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后,空气变冷,压力骤降,培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳,释放出来。培养基中的碳酸少了,当然会变碱。如果不烧瓶口的话,你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。(当然多多少少还是会有一点越用越碱,因为室温还是比冰箱内的温度高),其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下,你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话,这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌,除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来以后发现这里更彻底,超净台内根本就不点酒精灯;2)不要频繁看细胞。对于初学者而言,养细胞就像养孩子一样,有空就要去看看。细胞越是养不好,就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处,特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后,密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围,形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞,培养瓶这么一晃,把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞,细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管,细胞疯长;3)不要怕消化。在传代的时候,初学者往往生怕细胞消化过度,早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯,吹得满瓶子都是气泡。在我看来,用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候,37度消化过夜,细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有,动作要轻柔,尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的机械应力相当大,对细胞的伤害也是很大的。
LLC细胞系相关产品:SK-RC 52细胞、Eca 109细胞、OCI-AML-2细胞
NCI-H2009细胞系相关产品:CHP 212细胞、LS 174T细胞、WEHI3细胞
A375-SM细胞系相关产品:RT4-D6-P2T细胞、HepG2细胞、NCI-H165细胞
Lu-65细胞系相关产品:LO2细胞、NCIH661细胞、MDAMB175细胞
OCI AML5细胞系相关产品:H-1693细胞、Hs-688A-T细胞、X63Ag8.653细胞
LNCaP细胞系相关产品:Y79细胞、CCK81细胞、PE/CA-PJ34细胞
NCI-H524细胞系相关产品:DHL8细胞、IMR32细胞、UPCI-SCC090细胞
MDAMB453细胞系相关产品:MDA-MB-436细胞、H-1651细胞、SK-ML2细胞
HeLa S 3细胞系相关产品:YD-38细胞、C2BBe 1细胞、L-363细胞
P3J-HR-1细胞系相关产品:HFF1细胞、HIEC6细胞、MCF7-GFP细胞
NuTu-19细胞系相关产品:SUP-B15细胞、WI 38细胞、Tb 1-Lu细胞
NCIN87细胞系相关产品:H1876细胞、NCIH841细胞、NCI-H2405细胞
FRhK-4细胞系相关产品:IEC-18细胞、EA hy 926细胞、WEHI-164细胞
CAL-78 Adherent人软骨肉瘤细胞系
Hs746T细胞系相关产品:CEMC1细胞、TE-6细胞、U-87细胞
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HT-55细胞系相关产品:BT-474细胞、NS1/1-Ag4.1细胞、HLEB-3细胞
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Co-115细胞系相关产品:RIN Cl-5F细胞、HCT-FET细胞、MDAMB415细胞
B16/F10细胞系相关产品:Panc_05_04细胞、CAL 39细胞、HCC366细胞
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Pa18C细胞系相关产品:HS-766T细胞、BSC40细胞、NCI-441细胞
TGW细胞系相关产品:Clone Y-1细胞、ARO细胞、RCC-JF细胞
Sci-1细胞系相关产品:Anip-973细胞、EC-9706细胞、ECC 10细胞
LIM-1215细胞系相关产品:PANC0327细胞、CEMx721.174.T2细胞、GM00637F细胞
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RPMI1846细胞系相关产品:KYSE50细胞、RSC-96细胞、HASMC细胞
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Spodoptera frugiperda clone 9细胞系相关产品:IPLB-Sf21细胞、VP 267细胞、KBM5细胞
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EOC-20细胞系相关产品:SU-DHL-10细胞、KYSE-30细胞、MTC-TT细胞
NCI-H2087细胞系相关产品:SW962细胞、2B4细胞、KYSE30细胞
GM03570E细胞系相关产品:SU-DHL-2细胞、WM-239A细胞、Lu-165细胞
DR2R1610细胞系相关产品:253J细胞、50.B1细胞、Tregs细胞
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H2342细胞系相关产品:HGE细胞、3AA细胞、MC 3T3-E1细胞
NUGC-3细胞系相关产品:H-735细胞、MOLT 16细胞、HTR-8/SV neo细胞
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EBTr细胞系相关产品:RWPE2细胞、U-251MG细胞、RBL.2H3细胞
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