"Sol8 Adherent小鼠骨骼肌肌肉母细胞系
细胞背景资料:骨骼肌;C3H
细胞形态:上皮细胞样
贴壁消化难题:1,先用PBS 把细胞洗两遍,使瓶内没有血清了,减少对胰酶的中和,然后用新配的0.25%的胰酶加入3ml左右,放在37度,然后可以在细胞有些消化下来时,拿着瓶口,运用手腕的力量轻轻震荡瓶内液体,这样细胞很快就下来了,还不需要吹打,分散也均匀;2,成团、絮状:消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象,血清可以终止胰酶的作用,如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉,也可以不倒,直接加血清终止,如果消化液中加入了edta的话,就要将消化液倒干净,如果细胞贴壁要求不是很严格的话,一般不需要进行离心。鼻咽癌细胞的贴壁能力很强,用0.5%胰酶(含0.1%EDTA)一般要消化12~15min。用PBS洗涤时要洗净残余的培养基,加入胰酶后在培养箱中消化(避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性最强)至细胞收缩变圆(可显微镜下观察)且有少许细胞脱落(有流下来的趋势),随后立即弃去胰酶(如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验,则不能弃去胰酶),加入培养基仔细吹打(不能用无血清培养基或者PBS替代,否则细胞聚集成团块或絮状)。一般我都离心一次弃去上清(去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片);消化过度:马上用培养基中和,用吸管吹打细胞,收集全部的细胞到以无菌的离心管中800RPM 3分钟。弃上清,用全培重悬,换新的培养瓶继续培养,状态不好的细胞在培养的过程中会死亡脱落,在换液的时候可以清除掉!
细胞生长:贴壁
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
Sol8 Adherent小鼠骨骼肌肌肉母细胞系
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
血清必须贮存于–20~-70℃,若存放于4℃,请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶,可将40~45ml分装于无菌50ml离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40~45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。勿将血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定之成份亦会因此受到破坏,而影响血清之品质。血清凝絮物:发生之原因有许多种,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 变性及解冻后血清中存在之血纤维蛋白(fibrin) 造成,这些凝絮沈淀物不会影响血清本身之品质。若欲减少这些凝絮沈淀物,可用离心3000rpm,5min去除,或离心后上清液可以加入培养基中一起过滤。不建议用过滤步骤去除这些凝絮沈淀物,因为会阻塞过滤膜。显微镜下观察之“小黑点”:通常经过热处理之血清,沈淀物的形成会显著的增多。有些沈淀物在显微镜下观察像是“小黑点”,常会误认为血清遭受污染,而将血清放在37℃中欲培养此“微生物”,但在37℃环境下,又会使此沈淀物增多,更会误认为微生物之增殖,但以培养细菌之培养基检测,又没有污染。一般而言,此小黑点应不会影响细胞之生长,但若怀疑此血清之品质,应立即停用,更换另一批号的血清。
AU 565细胞系相关产品:Det 562细胞、OCM1细胞、WC00097细胞
Wayne State University-Head and Neck 13细胞系相关产品:NU-GC-4细胞、ND7/23细胞、H1792细胞
NCI-N87细胞系相关产品:NRK细胞、NCI-H2196细胞、Fetal Bovine Heart Endothelial细胞
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
Leukemia 1210细胞系相关产品:293T细胞、CL 1-0细胞、U-2OS细胞
JB6 Cl 30细胞系相关产品:MD Anderson-Metastatic Breast-435细胞、HEY-A8细胞、NCIH1184细胞
Hs739T细胞系相关产品:OCI-Ly 7细胞、B-cell with DC Morphology细胞、H-2171细胞
细胞生长特性:贴壁
Sol8 Adherent小鼠骨骼肌肌肉母细胞系
细胞形态特性:详见细胞说明书
细胞接收后的操作流程与注意事项:1)如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时联系实验室技术人员会跟进解决;2)贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(最高不能超过20%),或可根据该细胞生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养;3)生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养。
H-345细胞系相关产品:V79细胞、X63.Ag8.653细胞、MDA-PCa-2b细胞
OCI-Ly1细胞系相关产品:THPI细胞、Mahlavu细胞、HCC1500细胞
GM3569细胞系相关产品:P3.NS-1/1.Ag4.1细胞、MDA-MB361细胞、KNS-81细胞
CAOV4细胞系相关产品:G-292, clone A141B1细胞、Hs 766细胞、Panc08.13细胞
LLCMK2细胞系相关产品:L615细胞、Hs888Lu细胞、Hs_578t细胞
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Sol8 Adherent小鼠骨骼肌肌肉母细胞系
H-1666细胞系相关产品:OCI-AML-2细胞、BE(2)M-17细胞、HCC1428细胞
CEM clone 7细胞系相关产品:NKM-1细胞、BTI-TN5B1-4细胞、SW-620细胞
AKR细胞系相关产品:PA-TU S细胞、RS 4;11细胞、184A1细胞
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K 562细胞系相关产品:Walker/LLC-WRC 256细胞、RPMI2650细胞、H-1568细胞
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201T细胞系相关产品:Fetal Bovine Heart Endothelial细胞、KALS-1细胞、MDBK (NBL-1)细胞
RPE1-hTERT细胞系相关产品:H1993细胞、FRTL 5细胞、A2780S细胞
HPB/ALL细胞系相关产品:SP-2/0-AG14细胞、H-1299细胞、HGBEC细胞
TE-3A细胞系相关产品:COLO 741细胞、GM06141B细胞、SuperTube细胞
U87细胞系相关产品:PANC1005细胞、ECC10细胞、RCM1细胞
Rh30细胞系相关产品:HT 115细胞、Ramos.G6.C10细胞、JM-Jurkat细胞
Centre Antoine Lacassagne-39细胞系相关产品:Mv 1 Lu (NBL-7)细胞、High 5细胞、CD 18细胞
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B958细胞系相关产品:J774A.1细胞、C4-2 Bone metastatic细胞、NCI-H2195细胞
Sol8 Adherent小鼠骨骼肌肌肉母细胞系
IPLB-Sf21-AE细胞系相关产品:SNU1细胞、H-1648细胞、MT-2J细胞
IR983F细胞系相关产品:NK-92细胞、32D clone 3细胞、EL-4细胞
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