"FC33 epithelioid cells人胚肾细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:上皮细胞样
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析:总结1:复苏过程没有问题,是否是从液氮拿出直接放入温水,还有培养箱,二氧化碳浓度,培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%,看看能否帮助贴壁,当然也需要考虑血清问题,还有确信拿来的细胞没问题。总结2:首先应该怀疑冻存,实际上复苏出问题的可能非常小,因为操作简单,而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长,这是一般人所注意不到的,即使书上也不讲这个问题,太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力,表现为先贴后死,原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序,不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好,是什么,甘油还是DMSO,质量非常重要,否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多,ATCC推荐是不超过7%,大于5%,太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀,这个有一些影响,但不算太大。5、你的冻存是否按部就班,就是所温度梯度是不是把握严格,很多人容易忘却这个事情,因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染,你是否能很快看到,我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有,不赞成孵箱污染这个概念的,所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话,这个细菌是源于孵箱的,但这不代表孵箱污染,因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌,问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找,以后就不犯同样的问题,这个很重要,不能靠猜,否则你就有可能细胞养绝最后换课题,这个见得太多了,别不当会事。
Line 207细胞系相关产品:HCC1806细胞、BC-022细胞、U251-MG细胞
HCC0202细胞系相关产品:B-CPAP细胞、HT-29/CX-1细胞、OV-1063细胞
Psi2-DAP细胞系相关产品:Ca759细胞、UACC812细胞、TC-1[JHU-1]细胞
细胞生长:贴壁
FC33 epithelioid cells人胚肾细胞系
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
最近在培养细胞时,发现其状态不是很好,很容易扎堆生长,用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来,很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的,传代的第二天,有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢?你好,我养的细胞和你一样,消化下来也是一团的,但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀,分皿后在镜下看一看,移动培养皿的时候尽量动作轻,避免晃动。细胞生长挺快,那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能:一、细胞消化后吹打不均匀,造成细胞成团生长:二、细胞细化太过,细胞成片脱落,吹打时没有受力点,细胞聚团生长。解决办法:根据细胞生长的情况进行多次消化,将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养:一般步骤为:真空泵吸走培养基,1XPBS漂洗两次,加入1mlEDTA-Tripsin(100mm皿为例),37度放置数分钟,轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落,加入适量血清,以吸管上下吸放数次以打散细胞团块,离心后加入新鲜培养基,按比例转移至新皿。细胞的传代最重要的是胰酶处理时间,若胰酶处理太久,容易造成细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验:HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长,一般处理5-6min,C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落,2min足矣,P19Cl6和293细胞贴壁不紧,可在PBS漂洗后,直接换新鲜培养基打散。
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
MAVER细胞系相关产品:HuH 6细胞、FL-83B细胞、P3.NS-1/1.Ag4.1细胞
Human Corneal Endothelial Cells-12细胞系相关产品:SGC-7901/DDP细胞、BAEC细胞、UPCI-SCC-154细胞
DMS153细胞系相关产品:PL-9细胞、NCI-H1819细胞、SK-Mel1细胞
UMNSAH-DF-1细胞系相关产品:U343MG细胞、WM115mel细胞、VAESBJ细胞
H250细胞系相关产品:VM-CUB1细胞、RERF-LC-MS细胞、NU-GC-2细胞
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
FC33 epithelioid cells人胚肾细胞系
细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分
细胞形态特性:详见细胞说明书
细胞培养实验中常见问题总结:1)一般客户拿到细胞后,应该注意什么?客户收到细胞后先不开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制;2)快递细胞多久能到,是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞?我们采用快递发货,一般外地2--3天,寄细胞前请确认当地温度,如果气温低于4度的,则采用邮寄冻存细胞;3)可否使用与原先培养条件不同之培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无法存活;4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类?不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。
22Rv1细胞系相关产品:MDA.MB.231细胞、GM04680细胞、UT-7细胞
HEEpiC细胞系相关产品:Stanford University-Diffuse Histiocytic Lymphoma-6细胞、BE(2)-C细胞、JCA1细胞
SUM149细胞系相关产品:KBM7细胞、PA317细胞、SP-2/0-AG14细胞
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CCRFCEM细胞系相关产品:MM-1S细胞、SR786细胞、HTori:3细胞
EFM-19细胞系相关产品:SKMES细胞、RD-ES细胞、HT-115细胞
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HIBEpiC细胞系相关产品:HEK 293A细胞、Normal Rat Kidney-52E细胞、H2107细胞
FC33 epithelioid cells人胚肾细胞系
THPI细胞系相关产品:SK-N-BE(2C)细胞、NBL-12细胞、HS940细胞
HCC-2935细胞系相关产品:746T细胞、MOLT4细胞、253JBV细胞
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B-cell Acute Lymphoblastic Leukemia-1细胞系相关产品:SMMC7721细胞、NCI-HUT-460细胞、LSC-1细胞
MRC 5细胞系相关产品:BE2-C细胞、PE CA PJ34细胞、RC-4B细胞
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SW-480细胞系相关产品:NCI-H78细胞、MSB-1细胞、BALL-1细胞
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BNL-HCC细胞系相关产品:Walker 256细胞、Vero细胞、QGY细胞
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MKN 45细胞系相关产品:hRPTC细胞、SK-MEL-2-LUC细胞、T2细胞
FC33 epithelioid cells人胚肾细胞系
MPP89细胞系相关产品:HNEpC细胞、MBdSMC细胞、KS-SLK细胞
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