"NCI-H2087 Adherent人非小细胞肺腺癌细胞系
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞形态:上皮细胞样
细胞培养时分布不均匀,通常操作步骤:做细胞生物学实验,细胞铺板大概是我们最常见的一个实验。但有时候铺得不是很均匀:要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。下面为大家分享几点经验。尽量消化细胞分散成单细胞悬液。对于易于消化的细胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶润洗一遍(25cm2培养瓶或6孔板),弃掉胰酶,37度消化2-3分钟或室温消化5min左右,镜下观察是否细胞消化较为分散。如果不够,延长消化时间。96孔板一般以100微升每孔接种,直接用100微升移液器吸取细胞悬液,沿孔壁(稍离开一点孔底即可,不要离底太高)直接接入,移液器不需完全打到,轻轻按下即可,每铺完一行换一次枪头同时轻轻混匀细胞悬液。都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。6孔板、12孔板或24孔板,可采用将每个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔依此类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好。培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
细胞生长:贴壁
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H2087 Adherent人非小细胞肺腺癌细胞系
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
常规的细胞实验(增殖,凋亡,迁移,分化之类的),受消化影响不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验,比如病毒包装,对细胞代数,对细胞状态要求极高。这个时候,胰酶消化,就是润洗,都会对细胞包装病毒的能力有影响,传代次数一多,细胞包装能力就会逐渐下降(当然也有其它因素影响包装效率)。这个时候都不用胰酶消化,用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响ECM相关酶的活性,来使得细胞脱离基质附着表面,但不切割任何蛋白;EDTA的作用。许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白,trypsin切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法;PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。但这里面也有学问可以讲,对于一些难消化细胞,那么可以配制不含Ca,Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制trypsin的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞,不需要配制如此溶液。
Co 205细胞系相关产品:Hs1.Tes细胞、KNS81细胞、KYSE 270细胞
293AD细胞系相关产品:AHH-1细胞、GC-1spg细胞、UCLA-SO-14细胞
GM03320D细胞系相关产品:TK.10细胞、HLEB3细胞、RH35细胞
细胞传代方法:1:2-1:4传代;每周换液2次。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
RPMI7951细胞系相关产品:SK-N-BE(2)-C细胞、HT144细胞、TGW-nu细胞
PA I细胞系相关产品:GM00637H细胞、P3J.HR1K细胞、EU-2细胞
CL MC/9细胞系相关产品:HFL 1细胞、Walker256-TC细胞、NOR-10细胞
细胞生长特性:悬浮生长,有少数细胞疏松贴壁
NCI-H2087 Adherent人非小细胞肺腺癌细胞系
细胞形态特性:上皮样
养了几年细胞,说一点自己培养细胞方面的看法:1)培养细胞前,可以看看细胞特点说明书,包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等;2)不同细胞生长周期不同,有的生长很快,比如说MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了,有的又是特别慢,等的人心焦,BT474就是,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满,所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了;3)对于娇弱的细胞,就得细心呵护了,胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间,每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况;4)冻存细胞复苏后第二天更换一次培养基;5)培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次;6)养细胞的教训:不能偷懒!细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。1)不管买的细胞、惠赠的细胞,刚拿到手赶紧做两件事:检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存;2)发现有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时; 细菌污染,真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,买个支原体检测的kit定期检测一下;3)传代细胞日常的值日清洁是必须的,此外还要定期熏蒸;4)细胞的传代一定要规律,保持相同的confluency和传代时间间隔,不要随心所欲或者拖延;5)注意个人卫生。
Kelly细胞系相关产品:OSC19细胞、CHL-IU细胞、CCD-1095Sk细胞
IEC-6细胞系相关产品:AdHek细胞、OCI-LY-7细胞、Hs 839.T细胞
32D-Cl3细胞系相关产品:FT-293细胞、Co 115细胞、H1581细胞
CAL33细胞系相关产品:RPMI-1846细胞、Menschliche Und Tierische Zellkulture-1细胞、F-81细胞
MRC 5细胞系相关产品:BE2-C细胞、PE CA PJ34细胞、RC-4B细胞
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VP 229细胞系相关产品:COLO-680N细胞、BTI-Tn-5B1-4细胞、UM-UC3细胞
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BC3 H1细胞系相关产品:Hs-27细胞、Los Angeles Prostate Cancer-4细胞、LAC细胞
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WM266细胞系相关产品:KE-39细胞、NTERA2-cloneD1细胞、293EBNA细胞
NHLF细胞系相关产品:149PT细胞、A-1847细胞、Anglne细胞
ROS 17/28细胞系相关产品:A-427细胞、BpRcl细胞、Ly19细胞
T47-D细胞系相关产品:L 1210细胞、EFM-19细胞、CAL 33细胞
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C2-C12细胞系相关产品:AQ-Mel细胞、WEHI3细胞、KYSE-450细胞
D407细胞系相关产品:NIH:OVCAR-3细胞、IB-RS-2细胞、Panc5.04细胞
Karpas-422细胞系相关产品:Colon 38细胞、T.T细胞、Caco-2/ATCC细胞
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NCI-H2087 Adherent人非小细胞肺腺癌细胞系
Rat Chondrosarcoma Swarm细胞系相关产品:HL1细胞、HEK-293A细胞、MES 23.5细胞
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NCIH1838细胞系相关产品:High Five细胞、A-20细胞、RMS 1598细胞
Ca Ski细胞系相关产品:Tb 1 Lu (NBL-12)细胞、University of Michigan-Urothelial Carcinoma-14细胞、D-407细胞
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SU-86-86细胞系相关产品:HCA 7细胞、NCIH820细胞、OVCA8细胞
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