"LK2 epithelioid cells人肺鳞癌细胞系
细胞背景资料:肺鳞癌;男性
细胞形态:上皮细胞样
细胞复苏相关注意事项:1.取细胞的过程中注意带好防冻手套,护目镜。此项尤为重要,细胞冻存管可能漏入液氮,解冻时冻存管中的气温急剧上升,可导致爆炸。2.冻存液的问题:冻存液的配置已是常识,在这里不作详述,但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用,在常温下,二甲基亚砜对细胞的毒副作较大,因此,必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢,会造成细胞的损伤,二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高,注意加入少量培养液可稀释其浓度,以减少对细胞的损伤。4.离心问题:目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养,第二天换液。因为离心的目的是两个,去除DMSO,去除死细胞,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够活细胞沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了活细胞会受压过大,死亡。此外在操作过程中容易污染,所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO),DMSO对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液体前倒净,且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏,结果无异常。5.细胞贴壁少的问题:教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液,而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题:试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题:这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度,从如果你加培养基的太少,那么DMSO的浓度就会比较大,就会影响细胞生长,从以前的资料来看,DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响,还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
PCI-SG231细胞系相关产品:HT1376细胞、DU-145细胞、DF1细胞
HBZY-1细胞系相关产品:OCI-AML-3细胞、HSC1细胞、P-388细胞
H-2405细胞系相关产品:Lu-99A细胞、WiDr细胞、WM115F细胞
细胞生长:贴壁
LK2 epithelioid cells人肺鳞癌细胞系
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱,要轻柔操作。冻存细胞要快速融化,并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感,离心去除冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml;培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。离心方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀;以大约80x离心2到3分钟;弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞,并且进行活细胞计数。细胞铺板,细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个,可以区分为200多种不同类型的细胞:形态结构,代谢,行为,功能等各不相同。追根溯源,这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以,通常把发育过程中,细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段,也发生在胎儿出生以后,乃至成人阶段。例如,人体血细胞的产生和分化,这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞,转入分化,通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞,它们的基因表达和代谢活动各不相同。
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
Dunn LM8细胞系相关产品:343MG细胞、Fortner's melanotic melanoma #3细胞、BMSCs(mBMSCs)细胞
KYSE-410细胞系相关产品:TE1细胞、SKMEL-1细胞、BTT739细胞
HCASMC细胞系相关产品:NR-8383细胞、J-774细胞、MA-104细胞
BNL CL.2细胞系相关产品:TF1细胞、JURKAT E-6.1细胞、Colo-206F细胞
293-EBNA1细胞系相关产品:NS-1-Ag4-1细胞、RAW264.7细胞、Blotchy fibroblast-11细胞
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
LK2 epithelioid cells人肺鳞癌细胞系
细胞生长特性:贴壁
细胞形态特性:详见细胞说明书
培养细胞真的不难,最关键几点:1)所有的东西使用,如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的,真的很难相信你会把细胞养坏;2)动作要快,胰酶消化,换液什么,细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外,要掌握好胰酶消化时间,所谓的细胞状态差,很多时候是传代的原因;3)有时间的话,需要细胞计数,传相应数目的细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞的生长曲线,不会临时要处理,手足无措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,传代细胞的实验穿插进行,可以节省很多时间,也不会耽误别人的实验;5)个人的实验器具自己收一套,不要和别人混用,最近换了什么新的东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢;6)传代细胞不能进去太多人,避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丢了,培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套;3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测;4)水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏,勤换(灭菌水加进去);5)晚上离开的时候给传代细胞照紫外,超净台是用完就开;6)是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
WB-F344细胞系相关产品:NCI-H211细胞、Kit225/K6细胞、WM239A细胞
PTK-1细胞系相关产品:H2052细胞、CFPAC细胞、MuM-2B细胞
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LK2 epithelioid cells人肺鳞癌细胞系
NSC-34细胞系相关产品:CMK细胞、FRhK-4细胞、SKRC 39细胞
MeT 5A细胞系相关产品:SW1783细胞、IPI-2I细胞、Panc 02.03细胞
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58F细胞系相关产品:BNL CL2细胞、H1395细胞、NCI-H2135细胞
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HEK-AD 293细胞系相关产品:H184A1细胞、M059K细胞、CNLMG-B5537SKIN细胞
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LK2 epithelioid cells人肺鳞癌细胞系
Kato-III细胞系相关产品:Ramos 1细胞、Mel-RM细胞、ME180细胞
GM07404D细胞系相关产品:H1838细胞、33604细胞、NCI-H250细胞
H1048细胞系相关产品:IGROV1细胞、SW-1463细胞、KM12SM细胞
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