A-431 Cell:人皮肤鳞癌细胞系

"A-431 Cell:人皮肤鳞癌细胞系
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞背景资料：该细胞源自一位患有皮肤鳞状细胞癌的８５岁女性，是GiardDJ等人建立的一系列细胞株中的一株。该细胞在免疫抑制小鼠体内可成瘤，在琼脂上培养可形成克隆；是一个超三倍体人细胞株。
GM03320D细胞系相关产品：TK.10细胞、HLEB3细胞、RH35细胞
SF767细胞系相关产品：A2780CP70细胞、TE14细胞、KE 37细胞
NPC-TW039细胞系相关产品：Madison lung细胞、HCC-1954细胞、Ramos (RA)细胞
PLC-PRF-5细胞系相关产品：NCIH345细胞、DU 4475细胞、207细胞
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
A-431 Cell:人皮肤鳞癌细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
细胞传代方法：１：２传代
培养细胞真的不难，最关键几点：１)所有的东西使用，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；２)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；３)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；５)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，最近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；６)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?１)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；３)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；４)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；５)晚上离开的时候给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；６)是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
8402细胞系相关产品：VMCUB1细胞、BMDC细胞、WM 2664细胞
SAOS 2细胞系相关产品：EO771细胞、SU.86细胞、Toledo细胞
NCTC-1469细胞系相关产品：COLO-357细胞、Jeko1细胞、FRhK4细胞
COLO.205细胞系相关产品：PC3细胞、RCM1细胞、NCI-1155细胞
Verda reno细胞系相关产品：Roswell Park Memorial Institute 1788细胞、H9c2(2-1)细胞、KG1A细胞
细胞生长特性：贴壁生长
A-431 Cell:人皮肤鳞癌细胞系
细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
细胞形态特性：上皮样
LN 382细胞系相关产品：SK-N-FI细胞、T98G细胞、HuNS1细胞
Tb 1 Lu细胞系相关产品：MCF.10A细胞、BEL 7402细胞、NHRF细胞
SKMEL3细胞系相关产品：H146细胞、NCI-ADR-RES细胞、COV434细胞
HCC94细胞系相关产品：HCC-2218细胞、AN-3细胞、H2227细胞
SK.MEL.5细胞系相关产品：Co 115细胞、HCT.116细胞、PLA801C细胞
NCIH1734细胞系相关产品：SUDHL-1细胞、NCI-H1395细胞、SW-403细胞
RPMI8402细胞系相关产品：C-33 A细胞、MDCC MSB1细胞、Rat 1细胞
A-431 Cell:人皮肤鳞癌细胞系
L540细胞系相关产品：MES-SA/Dx5细胞、P31 FUJ细胞、RS(4;11)细胞
AAV-293细胞系相关产品：P19细胞、A1847细胞、HECV细胞
RMG-1细胞系相关产品：V79-GalK1细胞、LOU-NH-91细胞、OSC-19细胞
NFHIOSE-29细胞系相关产品：NCM356细胞、NCI-H2029细胞、NCIH1341细胞
SNU-620细胞系相关产品：DoHH2细胞、NPC-TW01细胞、NCIH1435细胞
Duke University 4475细胞系相关产品：SUM-190PT细胞、EM3细胞、CMT64细胞
T-47D细胞系相关产品：149 PT细胞、HT115细胞、BCaP-37细胞
HOC-1细胞系相关产品：SCC 25细胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3细胞、H-2023细胞
HEL-299细胞系相关产品：EoL-1细胞、TE3A细胞、NCIH810细胞
HEL-299细胞系相关产品：EoL-1细胞、TE3A细胞、NCIH810细胞
FET细胞系相关产品：CTLL-2细胞、N-Tera-2细胞、H-1563细胞
SMA-560细胞系相关产品：MD Anderson-Metastatic Breast-361细胞、801-D细胞、Tu-686细胞
MC/CAR细胞系相关产品：A-2058细胞、A 72细胞、WEHI 3B细胞
C127细胞系相关产品：M 1细胞、PTK 1细胞、TE6细胞
NCI-H510细胞系相关产品：NCI-H1755细胞、BE(2)M17细胞、BI-Mel细胞
GM04154细胞系相关产品：NE-1细胞、PC9细胞、CEL细胞
C3H10T1/2 clone8细胞系相关产品：COS-1细胞、MCF10A细胞、NCIH322细胞
MDCK Type II细胞系相关产品：LMH细胞、Michigan Cancer Foundation-12F细胞、HEC-1A细胞
CCRFCEM细胞系相关产品：MM-1S细胞、SR786细胞、HTori:3细胞
PNEC30细胞系相关产品：Ly7细胞、FHC细胞、BCPAP细胞
F56 [Human neoplasm]细胞系相关产品：CL-11细胞、PANC-02-03细胞、TE-85 clone 5细胞
SKNEP1细胞系相关产品：PG-LH7细胞、BV173细胞、HT3细胞
T84细胞系相关产品：A-2780细胞、KU 812细胞、GTL16细胞
KNS-42细胞系相关产品：P-388D1细胞、mRMEC细胞、T47-D细胞
W133细胞系相关产品：HN 4细胞、UPCISCC090细胞、Sp2/0细胞
130-T细胞系相关产品：G361-mel细胞、Pt-K2细胞、SUM 159PT细胞
EBNA-293细胞系相关产品：SKNBE(1)细胞、QBC(939)细胞、GP5d细胞
KMB17细胞系相关产品：Verda reno细胞、CNE-2Z细胞、801-D细胞
HNE-2细胞系相关产品：KOPN-8细胞、CL1.0细胞、Hepa 1-6细胞
CAL-148细胞系相关产品：253J-Bladder-V细胞、T-47-D细胞、COLO680N细胞
MRC5细胞系相关产品：SKNBE-1细胞、DSL6A/C1细胞、PCI-4B细胞
CT26-clone 25细胞系相关产品：MRCV细胞、Hce8693细胞、SF 539细胞
LU65细胞系相关产品：130 T细胞、H2405细胞、SW 1573细胞
MJ细胞系相关产品：RN细胞、NCI-SNU-119细胞、Jurkat-FHCRC细胞
SRA 01/04细胞系相关产品：HN4细胞、CEM-0细胞、MC38细胞
NCI N87细胞系相关产品：MGC-803细胞、MV4-11细胞、NCIH208细胞
Malme3M细胞系相关产品：NCIH1993细胞、MDCK2细胞、HEP3B2细胞
DiFi细胞系相关产品：SUDHL10细胞、MLM细胞、8305C细胞
HCC44细胞系相关产品：NCIH358细胞、SF295细胞、ME1细胞
BT549细胞系相关产品：HEC1-A细胞、U343MG细胞、DMS79细胞
VP303细胞系相关产品：Huh-7细胞、COLO 205细胞、MOLP-8细胞
AKR细胞系相关产品：PA-TU S细胞、RS 4;11细胞、184A1细胞
NG108-15细胞系相关产品：MRAEC细胞、Centre Antoine Lacassagne-78细胞、AA-Mel细胞
A-431 Cell:人皮肤鳞癌细胞系
D341细胞系相关产品：hFOB1.19细胞、CAL-120细胞、KASUMI6细胞
HPAF细胞系相关产品：Hs 729细胞、SKMEL-24细胞、SNK1细胞
NCIH508细胞系相关产品：UACC893细胞、SUM-52PE细胞、Evsa T细胞
Jiyoye细胞系相关产品：ABC-1细胞、LNCaP C4-2细胞、3AO细胞
SW620细胞系相关产品：Granta 519细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436细胞、Vero-76细胞
Cates-1B细胞系相关产品：BHK 21细胞、AAV-293细胞、DC 2.4细胞
LCMS细胞系相关产品：KRC-Y细胞、Tj-905细胞、CT-26细胞
SW-954细胞系相关产品：HB 611细胞、KG1细胞、PC 12细胞
UM2细胞系相关产品：Pt K1 (NBL-3)细胞、MDA-MB-435S细胞、Molm 14细胞
NCI-H1668细胞系相关产品：NPA细胞、Michigan Cancer Foundation-7细胞、HOS TE85细胞
HCE-2 [50.B1]细胞系相关产品：G-401细胞、HRA-19细胞、NCIH378细胞
GM02132细胞系相关产品：SNU-620细胞、Dami细胞、OCI-Ly19细胞
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