人增殖标记物Ki-67酶联免疫试剂盒

人增殖标记物Ki-67酶联免疫试剂盒

方法：双抗夹心法

保质期：12个月

测定长度： 1-4.5小时 1-3.5小时

优点：

有竞争力的价格。             预稀释的检测试剂A和B

高灵敏度。                   减少进行测试时的步骤数

高稳定性。                   所有试剂均可在4℃下保存

保质期12个月。              与其他品牌相比反应更快

                             保质期12个月

包装描述：

测定步骤总结

1.准备所有试剂，样品和标准品；

2.向每个孔中添加100µL标准液或样品。在37℃下孵育2小时；

3.吸出并加入100µL准备好的检测试剂A。在37℃孵育1小时；

4.吸净并清洗3次；

5.加入100µL制备的检测试剂B。在37℃孵育1小时；

6.吸气并清洗5次；

7.添加90µL底物溶液。在37℃下孵育15-25分钟；

8.添加50µL终止液。立即在450nm处读取。

需自备的设备及试剂

450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)

单道或多道微量加液器及吸头

稀释样品的EP管

蒸馏水或去离子水

吸水纸

盛放洗液的容器

试剂盒的储存及有效期

未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。

使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。

为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

注意：

试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

ELISA实验常见问题分析

ELISA实验因灵敏度高，特异性强在生物科研上得到了广泛的认可，但对初学者而言，如不注意实验操作过程中的各个环节，可能会对最终的实验结果产生比较大的影响，比如实验出现白板，显色弱灵敏度低，花板无梯度背景高等现象。下面对以上实验现象进行一一解析。

1.白板现象

在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中所有孔的颜色均为无色，即无信号呈现。

出现该现象的可能原因：

a.试剂已过保质期，不同批次稀释液交叉使用。

b.错加漏加检测A，检测B或者底物溶液TMB。

c.洗板或者加样过程中，酶标记物被污染失活，稀释液中含有酶抑制剂如叠氮呐等。

d.配置稀释液的蒸馏水可能被污染。

e.洗涤液是浓缩型的，没有按比例进行稀释。

f.酶标记物的活性和效价比较低。

g.溶液的PH值不正确，一般稀释液的PH值应保持在7.2-7.4。

2.显色弱灵敏度低

在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中孔的显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。

出现该现象的可能原因：

a.产品过有效期，试剂没有按规定进行适当的保存。

b.试剂，标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。

c.少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。

d.洗板或者加样过程中，酶标物受污染失活。

e.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。

f.洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长。

g.底物溶液TMB显色时间太短。

3.花板无梯度背景高

在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景也可能较高.

出现该现象的可能原因：

a.底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝。

b.孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附。

c.没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了。

d.加样时没有换枪头造成交叉污染。

e.花板现象：低浓度或者低活性的包被抗体或者检测抗体，封闭不足导致的本底不稳定，洗板不充分，包被板子的问题。

综上所述：在ELISA实验中应注意以下问题：

1.在实验前应该按相关要求将实验试剂平衡至室温。

2.包被抗体和检测抗体应该是有高活性的且都针对同一抗原。

3.试剂保存：蛋白抗体类试剂保存于-20摄氏度，显色液洗涤液保存于2-8摄氏度。

4.各试剂在使用前应充分混匀，以保证试剂的均一性和准确性。

5.严格控制反应温度和反应试剂。

6.洗板次数，洗板液的量，洗板液浸泡时间的长短，洗板的力度都是应该注意的问题。

7.相关浓缩液应按要求稀释到相应比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之间。

8.在终止反应时尽量避免微孔中存有气泡。

9.终止反应完成后应该在2min内完成酶标仪读数。

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！