人β神经生长因子（NGF-β）酶联免疫试剂盒
英文名称 Human NGF-β ELISA KIT
中文名称 人β神经生长因子（NGF-β）酶联免疫试剂盒
别 名 NGF, Beta-HSAN5, NGFB, nerve growth factor
保存条件 Store at 4°C for 6 months, at -20°C for 12 months. Avoid multiple freeze-thaw cycles (Shipped with wet ice.)
产品介绍 Nerve growth factor (NGF) is a neurotrophic factor and neuropeptide primarily involved in the regulation of growth, maintenance, proliferation, and survival of certain target neurons. It is perhaps the prototypical growth factor, in that it was one of the first to be described. Since it was first isolated by Nobel Laureates Rita Levi-Montalcini and Stanley Cohen in 1956, numerous biological processes involving NGF have been identified, two of them being the survival of pancreatic beta cells and the regulation of the immune system. NGF is initially in a 7S, 130-kDa complex of 3 proteins - Alpha-NGF, Beta-NGF, and Gamma-NGF (2:1:2 ratio) when expressed. This form of NGF is also referred to as proNGF (NGF precursor). The gamma subunit of this complex acts as a serine protease, and cleaves the N-terminal of the beta subunit, thereby activating the protein into functional NGF.The term nerve growth factor usually refers to the 2.5S, 26-kDa beta subunit of the protein, the only component of the 7S NGF complex that is biologically active (i.e. acting as signaling molecules). As its name suggests, NGF is involved primarily in the growth, as well as the maintenance, proliferation, and survival of nerve cells (neurons). In fact, NGF is critical for the survival and maintenance of sympathetic and sensory neurons, as they undergo apoptosis in its absence.[3] However, several recent studies suggest that NGF is also involved in pathways besides those regulating the life cycle of neurons. Nerve growth factor prevents or reduces neuronal degeneration in animal models of neurodegenerative diseases and these encouraging results in animals have led to several clinical trials in humans.NGF promotes peripheral nerve regeneration in rats.The expression of NGF is increased in inflammatory diseases where it suppresses inflammation.NGF appears to promote myelin repair.Hence NGF may be useful for the treatment of multiple sclerosis.[24] NGF could also be involved in various psychiatric disorders, such as dementia, depression, schizophrenia, autism, Rett syndrome, anorexia nervosa, and bulimia nervosa.
Important Note:
This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
神经生长因子 nerve growth factor 略称NGF。在将小鼠肉瘤180移植于3日龄鸡胚体壁时，与移植片连接的脊髓感觉神经节及交感神经节增大20%—40%，基于比克尔（E.D.Bueker，1948）的这一发现，斯坦利·科恩（Stanley Cohen，1954）等从小鼠肉瘤180和37中成功地分离出具有同一活性的核蛋白质，以后从蛇毒中分离出具有千倍活性（Cohen，R.Levi-Montalcini，1956）和从小鼠颚下腺分离出具有万倍活性的蛋白质（Cohen，1960），这种蛋白质被称为神经生长因子。科恩等认为，其有效成分是分子量约为2.2万的蛋白质，由两个亚单位构成的二合体或多合体显有活性。另一方面，瓦恩（S.Varon，1967）认为，活性成分是分子量约为14万的蛋白质，具有分子量约为3万的α、β、γ三种亚单位，仅β表现有NGF活性。将精制的NGF注射于鸡胚或初生小鼠，则发育中的感觉和交感神经节细胞的有丝分裂频率增高，细胞数增加，神经节体积显著增大。将兔的NGF抗血清注射于怀孕小鼠或初生小鼠等哺乳类，则生出来的幼体及实验个体的交感神经细胞出现选择性的坏死（免疫去交感）。对于培养中的神经节，其促进纤维生长和再生效果也是显著的，例如对7日龄的鸡胚分离的感觉神经节的培养，若向培养液中加NGF（0.01毫克/毫升），则在24小时内在神经节周围即可见到神经纤维呈旺盛的放射状伸长（晕圈效应），这种现象可被用于鉴定NGF的效果。NGF含于马、猪的颚下腺和小鼠肉瘤、小鼠胚胎及成体的交感神经细胞、小鼠尿和唾液、鸡胚的多种器官和一切哺乳类的血清中。 神经生长因子（NGF）是神经营养因子中最早被发现，目前研究最为透彻的，具有神经元营养和促突起生长双重生物学功能的一种神经细胞生长调节因子，它对中枢及周围神经元的发育、分化、生长、再生和功能特性的表达均具有重要的调控作用。NGF包含α、β、γ三个亚单位，活性区是β亚单位， 由两个118个氨基酸组成的单链通过非共价键结合而成的二聚体，与人体NGF的结构具有高度的同源性，生物效应也无明显的种间特异性。
方法：双抗夹心法
保质期：12个月
测定长度： 1-4.5小时 1-3.5小时
优点：
有竞争力的价格。 预稀释的检测试剂A和B
高灵敏度。 减少进行测试时的步骤数
高稳定性。 所有试剂均可在4℃下保存
保质期12个月。 与其他品牌相比反应更快
保质期12个月
包装描述：
测定步骤总结
1.准备所有试剂，样品和标准品；
2.向每个孔中添加100µL标准液或样品。在37℃下孵育2小时；
3.吸出并加入100µL准备好的检测试剂A。在37℃孵育1小时；
4.吸净并清洗3次；
5.加入100µL制备的检测试剂B。在37℃孵育1小时；
6.吸气并清洗5次；
7.添加90µL底物溶液。在37℃下孵育15-25分钟；
8.添加50µL终止液。立即在450nm处读取。
需自备的设备及试剂
450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
单道或多道微量加液器及吸头
稀释样品的EP管
蒸馏水或去离子水
吸水纸
盛放洗液的容器
试剂盒的储存及有效期
未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液，终止液保存于4℃，其他试剂保存于-20℃。
使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃，避免潮湿。
稳定性
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
注意：
试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
ELISA实验常见问题分析
ELISA实验因灵敏度高，特异性强在生物科研上得到了广泛的认可，但对初学者而言，如不注意实验操作过程中的各个环节，可能会对最终的实验结果产生比较大的影响，比如实验出现白板，显色弱灵敏度低，花板无梯度背景高等现象。下面对以上实验现象进行一一解析。
1.白板现象
在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中所有孔的颜色均为无色，即无信号呈现。
出现该现象的可能原因：
a.试剂已过保质期，不同批次稀释液交叉使用。
b.错加漏加检测A，检测B或者底物溶液TMB。
c.洗板或者加样过程中，酶标记物被污染失活，稀释液中含有酶抑制剂如叠氮呐等。
d.配置稀释液的蒸馏水可能被污染。
e.洗涤液是浓缩型的，没有按比例进行稀释。
f.酶标记物的活性和效价比较低。
g.溶液的PH值不正确，一般稀释液的PH值应保持在7.2-7.4。
2.显色弱灵敏度低
在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中孔的显色比较浅，即只有微弱的信号呈现。
出现该现象的可能原因：
a.产品过有效期，试剂没有按规定进行适当的保存。
b.试剂，标准品或者样品在使用前没有平衡到室温。
c.少加了试剂的量或者加入试剂的稀释比例不当。
d.洗板或者加样过程中，酶标物受污染失活。
e.孵育时间和孵育温度未达到实验要求。
f.洗涤液稀释倍数不符合要求，洗板次数过多，洗板冲击力过大，洗板浸泡时间过长。
g.底物溶液TMB显色时间太短。
3.花板无梯度背景高
在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景也可能较高.
出现该现象的可能原因：
a.底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝。
b.孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附。
c.没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了。
d.加样时没有换枪头造成交叉污染。
e.花板现象：低浓度或者低活性的包被抗体或者检测抗体，封闭不足导致的本底不稳定，洗板不充分，包被板子的问题。
综上所述：在ELISA实验中应注意以下问题：
1.在实验前应该按相关要求将实验试剂平衡至室温。
2.包被抗体和检测抗体应该是有高活性的且都针对同一抗原。
3.试剂保存：蛋白抗体类试剂保存于-20摄氏度，显色液洗涤液保存于2-8摄氏度。
4.各试剂在使用前应充分混匀，以保证试剂的均一性和准确性。
5.严格控制反应温度和反应试剂。
6.洗板次数，洗板液的量，洗板液浸泡时间的长短，洗板的力度都是应该注意的问题。
7.相关浓缩液应按要求稀释到相应比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之间。
8.在终止反应时尽量避免微孔中存有气泡。
9.终止反应完成后应该在2min内完成酶标仪读数。
特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
