"ETCC007：人乳腺导管癌传代细胞
细胞背景资料：原位导管癌；女性
H747细胞系相关产品：SUD-4细胞、MDA MB 231细胞、SUM-52PE细胞
Hs 822.T细胞系相关产品：SK-N-MC细胞、CV 1细胞、GCT0404细胞
细胞形态：上皮细胞样
细胞生长：贴壁
细胞冻存的步骤：１)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用０.２５% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(１０００r/min，１０分钟)；２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培养基，于４℃预冷１５分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为５×１０６～１×１０７/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；３)将分装上述细胞悬液于２ml冻存管中，每管０.２５ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；４)将装好细胞的冻存管放到冻存盒中，-８０℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-８０℃冰箱过夜，放入液氮罐);或者可以在４℃，２h;然后转到-２０℃，２h;-８０℃，２h;放入液氮罐；５)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
ETCC007：人乳腺导管癌传代细胞
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支)
TE354T细胞系相关产品：A2008细胞、RPMI6666细胞、PANC 813细胞
Hs-578T细胞系相关产品：MV411细胞、SGC-996细胞、H-2126细胞
LTEPa2细胞系相关产品：SNU-484细胞、PTK-1细胞、MADB106细胞
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。
贴壁细胞冻存注意事项：细胞冻存液需提前配制，不可直接将DMSO加入细胞悬液中；不同细胞消化时间有差异，以实际镜检结果为准，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，消化时间不宜过长；应选择汇合度80%-90%左右，细胞处于对数生长期时进行冻存操作，确保细胞冻存时状态，冻存密度可根据细胞特性进行调整；冻存细胞保存温度应低于-130℃，不可在-80℃长期保存。贴壁细胞冻存操作步骤：从培养箱中取出准备冻存的细胞；显微镜下观察细胞状态并拍照记录；酒精消毒培养瓶后放入安全柜中；吸去多余的培养基，加人2~3ml(PBS缓冲液)润洗一次；加入1ml胰酶，放入37℃消化；消化1min左右，在显微镜下观察细胞消化情况；消化完全后，加3ml完全培养基终止；将细胞悬液移入15ml离心管中离心，1000rpm/min（约200g）离心3-5min；吸去多余的液体，向细胞沉淀中加入适量的冻存液，轻轻吸打混匀；按比例分装至冻存管中；贴好标签后放入梯度冻存盒中；将冻存盒放入-80℃，降温过夜后，移入液氮中保存。贴壁细胞冻存实验准备事项：将15mL离心管、冻存管、PBS缓冲液、移液管、电动移液器等物品提前放入生物安全柜中，紫外照射30min消毒灭菌；细胞完全培养基、0.25%胰酶-0.02%EDTA、细胞冻存液等从4℃冰箱中取出后，复温至室温，备用；程序降温盒复温至室温备用。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
ETCC007：人乳腺导管癌传代细胞
细胞生长特性：贴壁
PaTu 8988 S细胞系相关产品：Panc 02细胞、PLC细胞、NCTC clone 929细胞
OVCA420细胞系相关产品：H 9细胞、MGH-U1细胞、CEM-CCRF细胞
NCI-H1563细胞系相关产品：HO-8910PM细胞、U87MG细胞、FHCRC-11细胞
Panc-08.13细胞系相关产品：C4-I细胞、Normal Rat, August 3, 1983细胞、MCF 7细胞
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
Hepa1-6细胞系相关产品：Dx5细胞、CATH-a细胞、SAS细胞
AN3 CA细胞系相关产品：BV-2细胞、Ishikawa细胞、COLO 679细胞
ML2细胞系相关产品：HARA-B细胞、H-526细胞、SGC996细胞
ECC-10细胞系相关产品：LICR-LON-HN6-R细胞、Z138细胞、MDA-MB436细胞
Doubling time: ~50 hours (ATCC).细胞系相关产品：OV1/P细胞、HFL细胞、RBSMC细胞
H157细胞系相关产品：CCRF-CEM C1细胞、NCIH1048细胞、NCIH841细胞
SJ-Rh 30细胞系相关产品：LLC PK1细胞、H716细胞、RKN细胞
NCIH660细胞系相关产品：UCLA-SO-14细胞、UM-RC-2细胞、KAT5细胞
CoC1细胞系相关产品：D324细胞、L540细胞、74Int细胞
Hs 852.T细胞系相关产品：IR 983F细胞、HS852.T细胞、NTC-200细胞
JJN3细胞系相关产品：DrG细胞、SK-RC 39细胞、MiaPaca.2细胞
RT-BM细胞系相关产品：DHL6细胞、H-740细胞、OKAC1细胞
ROS-17/2.8细胞系相关产品：MDA2B细胞、COLO 824细胞、GM03570E细胞
SB细胞系相关产品：SU8686细胞、KG-1细胞、Tu 177细胞
YAC-1细胞系相关产品：THLE-3细胞、Hu-P-T3细胞、THP 1细胞
GM00637F细胞系相关产品：TMD-8细胞、H766T细胞、X63-Ag8细胞
GM00637F细胞系相关产品：TMD-8细胞、H766T细胞、X63-Ag8细胞
NCI H69细胞系相关产品：SU.86.86细胞、CAL51细胞、SNU-387细胞
H-2009细胞系相关产品：NTera 2细胞、SJSA-1细胞、Caco2-BBE细胞
H-28细胞系相关产品：NCIH2126细胞、NCI-H2228细胞、UACC-812细胞
RINm-5F细胞系相关产品：Capan-2细胞、NCIH1781细胞、hs 68细胞
HPDE6c7细胞系相关产品：B16F1细胞、BCPAP细胞、RCC 786-O细胞
B-95-8细胞系相关产品：L-cell细胞、CAMA细胞、KTC-1细胞
SNU-C2B细胞系相关产品：MDA-MB-435细胞、H-82细胞、HuLEC-5a细胞
EFM-192B细胞系相关产品：NCIH548细胞、CEK细胞、Hs 578T细胞
H711细胞系相关产品：IMCD-3细胞、SW 982细胞、MGHU3细胞
ETCC007：人乳腺导管癌传代细胞
Uhth-74细胞系相关产品：HOS (TE85, Clone F5)细胞、P30-OHK细胞、OSKM-1细胞
786-O RCC细胞系相关产品：SMA 560细胞、Murine Carcinoma-38细胞、VK2/E6E7细胞
NK-10A细胞系相关产品：X63细胞、EFO 27细胞、LL/2(LLc1)细胞
BEAS 2B细胞系相关产品：NTERA-2细胞、MM1.S细胞、NCI-HUT-125细胞
COLO 357细胞系相关产品：MB-49细胞、PC 61-5-3细胞、AR42J细胞
C8D1A细胞系相关产品：NCIH1930细胞、HELA-GFP细胞、Dunn LM8细胞
GM01232E细胞系相关产品：P3.times.63 Ag8.653细胞、CATH.a细胞、RS 4;11细胞
MOLT4细胞系相关产品：HME-1细胞、VeroE6细胞、Medical University of Graz-Chordoma 1细胞
PA1细胞系相关产品：Nb2a细胞、EJ-1细胞、K-562细胞
253J-Bladder-V细胞系相关产品：LA 4细胞、KMST-6细胞、PAI细胞
HS 445T细胞系相关产品：MDA.MB.435细胞、PK15细胞、L-cells细胞
NPA87细胞系相关产品：DU 145细胞、Sc-1细胞、SHEP1细胞
NG10815细胞系相关产品：P30-OHK细胞、B78细胞、IOSE-80细胞
HGMC细胞系相关产品：MFE 296细胞、DSL-6A/C1细胞、OVCAR-8细胞
BE(2)M17细胞系相关产品：Mhh-Call 2细胞、MPP-89细胞、Normal Rat, August 3, 1983细胞
BLO-11细胞系相关产品：3T3-Swiss细胞、MCF 7B细胞、16HBE细胞
B16细胞系相关产品：Panc-08.13细胞、CCD33Co细胞、Panc-8_13细胞
NBLAN5T细胞系相关产品：KFB细胞、HEL-299细胞、CEK细胞
NPA'87细胞系相关产品：Lewis-Lung细胞、HBZY1细胞、87 MG细胞
RPPVEC细胞系相关产品：H209细胞、HCT FET细胞、UACC893细胞
COLO-205细胞系相关产品：NCI-H1105细胞、COV 434细胞、NMCG-1细胞
COLO-205细胞系相关产品：NCI-H1105细胞、COV 434细胞、NMCG-1细胞
J82COT细胞系相关产品：SK MES 1细胞、P3-X63-Ag 8.653细胞、SJCRH30细胞
HEK-293 c18细胞系相关产品：brain-derived Endothelial cells.3细胞、Caki2细胞、GES-1细胞
Potorous tridactylus Kidney 2细胞系相关产品：KYSE30细胞、RCC 7860细胞、Farage细胞
Hs294T细胞系相关产品：MDAPCa-2b细胞、DanG细胞、J-82细胞
BXPC3细胞系相关产品：ARPE-19细胞、Roswell Park Memorial Institute 6666细胞、H-7721细胞
HUT-28细胞系相关产品：P-815细胞、Hut292细胞、NMCG1细胞
GM05862细胞系相关产品：H-1404细胞、Hs695T细胞、OVCA-433细胞
WiDr/S细胞系相关产品：WERI-Rb1细胞、MDCK (NBL-2)细胞、Hs-343-T细胞
EBC1细胞系相关产品：Panc 04.03细胞、NK 10a细胞、KNS-62细胞
Hs343T细胞系相关产品：Colon 26细胞、HPDLF细胞、FAO-1细胞
H-1417细胞系相关产品：CFPAC1细胞、NCIH1581细胞、KOSC-2 cl3-43细胞
BIC1细胞系相关产品：NCI-H1048细胞、TR 146细胞、AHH-1细胞
ETCC007：人乳腺导管癌传代细胞
J774A1细胞系相关产品：H676细胞、OVCAR 432细胞、CaEs17细胞
STC-1细胞系相关产品：Tu-686细胞、PASMCS细胞、CHO-Lec1细胞
J 774A.1细胞系相关产品：Panc4.03细胞、Human fetal lung fibroblast 1细胞、SUM 102细胞
ML2细胞系相关产品：HARA-B细胞、HEK-AD293细胞、Psi-2-DAP细胞
P-388细胞系相关产品：CW-2细胞、NCIH1836细胞、Saos2细胞
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