"HMEL:永生上皮传代细胞
细胞背景资料:上皮细胞;永生化
MAVER细胞系相关产品:HuH 6细胞、FL-83B细胞、P3.NS-1/1.Ag4.1细胞
AML12细胞系相关产品:MC-3T3-E1细胞、PIG3细胞、Panc-08.13细胞
细胞形态:上皮细胞样
细胞生长:贴壁
细胞冻存的步骤:1)选择处于对数生长期的细胞,在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min,10分钟);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培养基,于4℃预冷15分钟后,逐滴加入已无菌的DMSO或甘油,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,细胞浓度为5×106~1×107/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具体要看培养的细胞类型来选择;3)将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中,每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧,并标记好细胞名称和冻存日期,同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数);4)将装好细胞的冻存管放到冻存盒中,-80℃冰箱过夜。;如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐);或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)细胞冻存在液氮中可以长期保存,但为妥善起见,冻存半年后,取出一只冻存管细胞复苏培养,观察生长情况,然后再继续冻存。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
HMEL:永生上皮传代细胞
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
UPCISCC154细胞系相关产品:FTC133细胞、SK-N-BE(1)n细胞、138 MG细胞
DI-TNC1细胞系相关产品:SN12CPM6细胞、Baby Hamster Kidney from litter No. 21细胞、hEM15A细胞
LL2细胞系相关产品:UMNSAH-DF 1细胞、HL-60细胞、SW 1116细胞
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
冻存和复苏的原则:慢冻快融》当细胞冷到零度以下,可以产生以下变化:细胞器脱水,细胞中可溶性物质浓度升高,并在细胞内形成冰晶。如果缓慢冷冻,可使细胞逐步脱水,细胞内不致产生大的冰晶;相反,结晶就大,大结晶会造成细胞膜、纲胞器的损伤和破裂。复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。慢冻程序》1.标准程序:采用细胞冻存器》当温度在-25℃以上时,1~2℃/min;当温度达-25℃以下时,5~10℃/min;当温度达-100℃时,可迅速放入液氮中。2.简易程序:将冷冻管(管口要朝上)放入纱布袋内,纱布袋系以线绳,通过线绳将纱布袋固定于液氮罐罐口,按每分钟温度下降1~2℃的速度,在40min内降至液氮表面过夜,次晨投人液氮中。3.传统程序:冷冻管置于4℃10分钟→-20℃30分钟→-80℃16~18小时(或隔夜)→液氮槽长期储存。细胞冻存方法:1.预先配制冻存液》(1)8%DMSO+细胞生长液(92%血清)2.取对数生长期细胞,经胰酶消化后,加入适量冻存液,用吸管吹打制成细胞悬液(1×10(6)~5×10(6)细胞/ml)。3.加入1ml细胞于冻存管中,密封后标记冷冻细胞名称和冷冻日期。液氮长期保存。保存细胞的复苏方法:1.快速解冻》冻存细胞从液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1分钟内全部融化(不要超过3分钟)。2.解冻后的细胞可直接接种到含完全生长培养液的细胞培养瓶中直接进行培养,24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液,以去除DMSO。3.如果细胞对冷冻保护剂特别敏感解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系
HMEL:永生上皮传代细胞
细胞生长特性:贴壁
MDA-436细胞系相关产品:RKOAS451细胞、BNL-CL.2细胞、HUT28细胞
WEHI 231细胞系相关产品:Tn 5B1-4细胞、H1793细胞、H647细胞
JJN-3细胞系相关产品:HOC1细胞、CW2细胞、UMUC14细胞
LC-2-Ad细胞系相关产品:SKRC 39细胞、HLFa细胞、WB-F344细胞
细胞消化过程总结:其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性,无论死活的细胞都是如此,你可以尝试,准备100%的单个细胞悬液,贴壁后观察细胞,仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此,容易聚集,不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液(不要笑,这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误,以为悬浮培养就是一个一个分开)。细胞只要能从基质上脱离下来,这个时候即使是成片的(比如Calu-3细胞),吹打不超过20次后(一般10次即可),成小规模聚集(10个细胞左右),是正常的,不要试图再去延长消化时间,或者像有的同学那样吹打1h,等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞(润洗方法5min还不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足够了,一般我加300ul。即使这样难消化的细胞,一般不超过5min,即可见细胞成片移动,就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候,比如tsDC细胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙状移动。
BRL-3A细胞系相关产品:Calu-6细胞、Hi5细胞、KM.12细胞
A2780-CP细胞系相关产品:Hs 578.T细胞、NG10815细胞、KM-H2细胞
AMO-1细胞系相关产品:Th17细胞、SSP-25细胞、VP303细胞
SKN-SH细胞系相关产品:Hs606细胞、GOS-3细胞、B16-F0细胞
SW480细胞系相关产品:HPAEpiC细胞、SK-LMS-1细胞、TK-1细胞
RTE细胞系相关产品:ECC-1细胞、UACC 893细胞、H-250细胞
MHCC97-L细胞系相关产品:SKCO1细胞、SACC83细胞、NCI-H2126细胞
KYSE-50细胞系相关产品:Hs604T细胞、Calu 3细胞、SW 620细胞
WiDr-TC细胞系相关产品:Los Angeles Prostate Cancer-4细胞、SUM-190PT细胞、WIL2 Secreting细胞
SW1990细胞系相关产品:SNU1040细胞、CACO2细胞、C-4I细胞
CA 46细胞系相关产品:D283 Med细胞、WERI-Rb 1细胞、Colo741细胞
MN-60细胞系相关产品:Wien133细胞、H-838细胞、HCC1599细胞
DKMG细胞系相关产品:NR8383.1细胞、ECC 12细胞、Hs821T细胞
FRO 81-2细胞系相关产品:hTERT-RPE1细胞、Ect1/E6E7细胞、IMCD3细胞
TCCPAN2细胞系相关产品:HLEC细胞、QGP-1细胞、OP9细胞
SK-N-BE2细胞系相关产品:SNT8细胞、NCI-H676B细胞、SUM159细胞
SK-N-BE2细胞系相关产品:SNT8细胞、NCI-H676B细胞、SUM159细胞
OCLY8细胞系相关产品:PF-382细胞、Hs940T细胞、U251MG细胞
NB4细胞系相关产品:Hep G2细胞、H524细胞、COR-L105细胞
NCIH1436细胞系相关产品:RD-ES细胞、NR8383细胞、HLEC细胞
RS 4;11细胞系相关产品:MPC5细胞、H-1404细胞、D-341 Med细胞
HSC-T6细胞系相关产品:Hs742T细胞、MM6细胞、HOC-1细胞
SKLU1细胞系相关产品:BTI-Tn-5B1-4细胞、H2085细胞、CNE2细胞
TE354.T细胞系相关产品:S.B.细胞、HCC44细胞、RS1细胞
OV-1063细胞系相关产品:C127细胞、SKMES1细胞、HCT-15细胞
HOC1细胞系相关产品:LIXC-002细胞、H1092细胞、OVCA420细胞
HMEL:永生上皮传代细胞
SK-MEL-MeWo细胞系相关产品:SP2-0-Ag14细胞、Ly8细胞、NEC细胞
T 98 G细胞系相关产品:FHs74Int细胞、MLA144细胞、MPC-83细胞
TPC1细胞系相关产品:TE-4细胞、Mono Mac 1细胞、U-373MG细胞
Hs 445细胞系相关产品:OP9细胞、TK.10细胞、H-1963细胞
Hs 888Lu细胞系相关产品:Ramos 2G6 4C10细胞、KP2细胞、KYSE70细胞
NCIH146细胞系相关产品:NCI-H64细胞、A375SM细胞、293-F细胞
PL 45细胞系相关产品:RK 13细胞、HC-11细胞、Human Embryo Lung-1细胞
HOP62细胞系相关产品:UM-RC-2细胞、SK-OV-3细胞、Ku812F细胞
SK-OV-433细胞系相关产品:KYSE-450细胞、WIL2S细胞、DMS 273细胞
HEL-92细胞系相关产品:Hs 737.T细胞、NCIH1184细胞、PT-K75细胞
MDA231-LM2-4175细胞系相关产品:CSQT-2细胞、Leukemia L1210细胞、HCT-FET细胞
NCIH2286细胞系相关产品:IHH-4细胞、Roswell Park Memorial Institute 8402细胞、HCT/Taxo1细胞
OCIAML3细胞系相关产品:BetaTC6细胞、GM2132细胞、HS-5细胞
SRA 01/04细胞系相关产品:HN4细胞、CEM-0细胞、MC38细胞
VMRC-LCD细胞系相关产品:M059K细胞、NBL-S细胞、NCI-H1522细胞
VMRCLCD细胞系相关产品:L-5178-Y-R细胞、PaTu-8988s细胞、Astrocyte type I clone细胞
AG06814-J细胞系相关产品:BAC1.2F5细胞、Pt K2细胞、LWnt-3A细胞
Loucy细胞系相关产品:Hep G2/C3A细胞、Mc Ardle 7777细胞、Hs294T细胞
Hs600T细胞系相关产品:SNK1细胞、Hs832T细胞、U20-S细胞
OCI-Ly10细胞系相关产品:RIN-m 14B细胞、Hs 578T细胞、P388.D1细胞
RAT2细胞系相关产品:Rat 2细胞、Walker256细胞、P31 FUJ细胞
BT549细胞系相关产品:HEC1-A细胞、U343MG细胞、DMS79细胞
T98细胞系相关产品:SUPB-15细胞、CF PAC-1细胞、MV-4-11细胞
CV-1 in Origin Simian-7细胞系相关产品:MCF-7/ADR细胞、U937细胞、Vero C1008细胞
NG10815细胞系相关产品:P30-OHK细胞、B78细胞、IOSE-80细胞
HSC(Human Schwann)细胞系相关产品:CCC-HHM-2细胞、SupB15W细胞、GM17219细胞
A2780/CP70细胞系相关产品:A-375SM细胞、SNU-16细胞、alpha TC1-6细胞
Mouse Bladder Tumor line-2细胞系相关产品:NPA87-1细胞、Porcine Kidney-15细胞、IPLB-SF-21细胞
OCI/AML4细胞系相关产品:SK-N-BE-2c细胞、MPC11细胞、OCI/AML4细胞
TGHAVSMC细胞系相关产品:HCC70细胞、Hs839.T细胞、Raji细胞
P388D1细胞系相关产品:MCF7ADR细胞、LTEP-sm细胞、HCC-70细胞
hEEC细胞系相关产品:Pa017C细胞、A-2780细胞、MM.1S细胞
Hep G2-Luc细胞系相关产品:SUDHL-5细胞、A673细胞、Ls-174-T细胞
OVCAR-4细胞系相关产品:WML2细胞、MBT2细胞、H-2591细胞
HMEL:永生上皮传代细胞
NCI-H2009细胞系相关产品:CHP 212细胞、LS 174T细胞、WEHI3细胞
DH-82细胞系相关产品:PANC-03-27细胞、WSU-DLCL-2细胞、WEHI 164细胞
VAESBJ细胞系相关产品:ELD-1细胞、H-2108细胞、Malme-3 M细胞
AMO-1细胞系相关产品:Th17细胞、NBLS细胞、CHL-IU细胞
Rat Skin 1细胞系相关产品:KYSE-30细胞、2B4细胞、Sp2/0-Ag14细胞
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