哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

信裕生物生产的哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)，采用了经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100-150kb以上的基因组DNA。
用本试剂盒抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。
通常使用本试剂盒，从20毫克组织可以抽提到约40微克基因组DNA，从10⁶-10⁷Hela细胞可以抽提到约5-50微克基因组DNA。
本试剂盒足够抽提50个常规量的样品。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存，一年有效。10M醋酸铵和Nuclease Free Water也可以室温保存。
注意事项：
需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。
如果打算抽提到大片段的基因组DNA，则要尽量避免基因组DNA的物理性剪切。例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取含有基因组DNA的样品。
不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明：
1. 样品收集
a. 对于组织样品：
切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。
b. 对于贴壁细胞：
胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
c. 对于悬浮细胞：
1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2. 基因组DNA抽提
a. 样品处理完毕后，每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
b. 对于上述处理好的样品，每20毫克组织或10⁶-10⁷个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，颠倒混匀数次，充分裂解组织或细胞。
c. 50℃水浴消化过夜。
d. 加入500微升Tris平衡苯酚抽提样品。
e. 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次。
f. 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次。
g. 吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。
h. 10,000g 离心1分钟，弃上清。加入70%乙醇洗涤DNA沉淀两次。
i. 尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100微升Nuclease Free Water溶解DNA。注意：不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。