pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)
pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)是信裕生物自行研发的用于检测TNF-α promoter转录活性水平的报告基因质粒。
pTNF-α-promoter-luc是以信裕生物的pGL6质粒为模板,在其多克隆位点插入了human TNF-α的启动子序列(-991bp~+1bp),可以高灵敏度地检测human TNF-α promoter的激活水平。
TNF-α(Tumor Necrosis Factor α),中文名为肿瘤坏死因子α,是一种非常重要的炎性细胞因子,在炎性疾病的发生发展过程中起重要作用,常作为炎症反应的重要指标。
pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pTNF-α-promoter-luc质粒的主要信息如下:
luc2 reporter gene
1056-2708
SV40 late poly(A)signal
2743-2964
SV40 early enhancer/promoter
3012-3430
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region
3455-4249
Synthetic poly(A)signal
4274-4322
Reporter Vector primer 4(RVprimer4)binding region
4389-4408
ColE1-derived plasmid replication origin
4646
Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region
5437-6297
Synthetic poly(A)signal/transcriptional pause site
6402-6555
Reporter Vector primer 3(RVprimer3)binding region
6504-6523
pTNF-α-promoter-luc质粒的图谱如下:
pTNF-α-promoter-luc的多克隆位点及TNF-α promoter的详细图谱如下:
1
GGCCTAACTG
GCTCCTGGGA
GATATGGCCA
CATGTAGCGG
CCGGATTGAC
CGAGGACCCT
CTATACCGGT
GTACATCGCC
51
CTCTGAGGAA
TGGGTTACAG
GAGACCTCTG
GGGAGATGTG
ACCACAGCAA
GAGACTCCTT
ACCCAATGTC
CTCTGGAGAC
CCCTCTACAC
TGGTGTCGTT
101
TGGGTAGGAG
AATGTCCAGG
GCTATGGAAG
TCGAGTATGG
GGACCCCCCC
ACCCATCCTC
TTACAGGTCC
CGATACCTTC
AGCTCATACC
CCTGGGGGGG
151
TTAACGAAGA
CAGGGCCATG
TAGAGGGCCC
CAGGGAGTGA
AAGAGCCTCC
AATTGCTTCT
GTCCCGGTAC
ATCTCCCGGG
GTCCCTCACT
TTCTCGGAGG
201
AGGACCTCCA
GGTATGGAAT
ACAGGGGACG
TTTAAGAAGA
TATGGCCACA
TCCTGGAGGT
CCATACCTTA
TGTCCCCTGC
AAATTCTTCT
ATACCGGTGT
251
CACTGGGGCC
CTGAGAAGTG
AGAGCTTCAT
GAAAAAAATC
AGGGACCCCA
GTGACCCCGG
GACTCTTCAC
TCTCGAAGTA
CTTTTTTTAG
TCCCTGGGGT
301
GAGTTCCTTG
GAAGCCAAGA
CTGAAACCAG
CATTATGAGT
CTCCGGGTCA
CTCAAGGAAC
CTTCGGTTCT
GACTTTGGTC
GTAATACTCA
GAGGCCCAGT
351
GAATGAAAGA
AGAAGGCCTG
CCCCAGTGGG
GTCTGTGAAT
TCCCGGGGGT
CTTACTTTCT
TCTTCCGGAC
GGGGTCACCC
CAGACACTTA
AGGGCCCCCA
401
GATTTCACTC
CCCGGGGCTG
TCCCAGGCTT
GTCCCTGCTA
CCCCCACCCA
CTAAAGTGAG
GGGCCCCGAC
AGGGTCCGAA
CAGGGACGAT
GGGGGTGGGT
451
GCCTTTCCTG
AGGCCTCAAG
CCTGCCACCA
AGCCCCCAGC
TCCTTCTCCC
CGGAAAGGAC
TCCGGAGTTC
GGACGGTGGT
TCGGGGGTCG
AGGAAGAGGG
501
CGCAGGGACC
CAAACACAGG
CCTCAGGACT
CAACACAGCT
TTTCCCTCCA
GCGTCCCTGG
GTTTGTGTCC
GGAGTCCTGA
GTTGTGTCGA
AAAGGGAGGT
551
ACCCCGTTTT
CTCTCCCTCA
AGGACTCAGC
TTTCTGAAGC
CCCTCCCAGT
TGGGGCAAAA
GAGAGGGAGT
TCCTGAGTCG
AAAGACTTCG
GGGAGGGTCA
601
TCTAGTTCTA
TCTTTTTCCT
GCATCCTGTC
TGGAAGTTAG
AAGGAAACAG
AGATCAAGAT
AGAAAAAGGA
CGTAGGACAG
ACCTTCAATC
TTCCTTTGTC
651
GCCACAGACC
TGGTCCCCAA
AAGAAATGGA
GGCAATAGGT
TTTGAGGGGC
CGGTGTCTGG
ACCAGGGGTT
TTCTTTACCT
CCGTTATCCA
AAACTCCCCG
701
ATGGGGACGG
GGTTCAGCCT
CCAGGGTCCT
ACACACAAAT
CAGTCAGTGG
TACCCCTGCC
CCAAGTCGGA
GGTCCCAGGA
TGTGTGTTTA
GTCAGTCACC
751
CCCAGAAGAC
CCCCCTCGGA
ATCGGAGCAG
GGAGGATGGG
GAGTGTGAGG
GGGTCTTCTG
GGGGGAGCCT
TAGCCTCGTC
CCTCCTACCC
CTCACACTCC
801
GGTATCCTTG
ATGCTTGTGT
GTCCCCAACT
TTCCAAATCC
CCGCCCCCGC
CCATAGGAAC
TACGAACACA
CAGGGGTTGA
AAGGTTTAGG
GGCGGGGGCG
851
GATGGAGAAG
AAACCGAGAC
AGAAGGTGCA
GGGCCCACTA
CCGCTTCCTC
CTACCTCTTC
TTTGGCTCTG
TCTTCCACGT
CCCGGGTGAT
GGCGAAGGAG
901
CAGATGAGCT
CATGGGTTTC
TCCACCAAGG
AAGTTTTCCG
CTGGTTGAAT
GTCTACTCGA
GTACCCAAAG
AGGTGGTTCC
TTCAAAAGGC
GACCAACTTA
951
GATTCTTTCC
CCGCCCTCCT
CTCGCCCCAG
GGACATATAA
AGGCAGTTGT
CTAAGAAAGG
GGCGGGAGGA
GAGCGGGGTC
CCTGTATATT
TCCGTCAACA
1001
AGATCTGCAG
AAGCTTGGCA
ATCCGGTACT
GTTGGTAAAG
TCTAGACGTC
TTCGAACCGT
TAGGCCATGA
CAACCATTTC
pTNF-α-promoter-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pTNF-α-promoter-luc)包括:
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
BsaA I
BsiW I
BspM II
BssH II
Eco72 I
EcoR V
Mlu I
Nde I
Nhe I
Nru I
PaeR7 I
Pme I
Pml I
Psp1406 I
Rsr II
SnaB I
Spl I
pTNF-α-promoter-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut ppTNF-α-promoter-luc once)包括:
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
3930
Bgl I
GCCN,NNN`NGGC
9
BsiC I
TT`CG,AA
4325
Acc65 I
G`GTAC,C
15
BstB I
TT`CG,AA
4325
Asp718
G`GTAC,C
15
Sal I
G`TCGA,C
4339
Kpn I
G,GTAC`C
19
ApaL I
G`TGCA,C
4903
Bsa I
GGTCTC 7/11
66
HgiE II
ACCNNNNNNGGT
-1/13 5168
EcoR I
G`AATT,C
388
Not I
GC`GGCC,GC
5409
Tth111 I
GACN`N,NGTC
661
BstE II
G`GTNAC,C
5436
Sac I
G,AGCT`C
911
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
5511
Bgl II
A`GATC,T
1012
Pvu I
CG,AT`CG
5881
Hind III
A`AGCT,T
1022
Sac II
CC,GC`GG
5905
BsrG I
T`GTAC,A
1547
Bst1107 I
GTA|TAC
6021
Dra III
CAC,NNN`GTG
2203
Xca I
GTA|TAC
6021
Mun I
C`AATT,G
2883
Spe I
A`CTAG,T
6340
BamH I
G`GATC,C
2976
BsmB I
CGTCTC 7/11
6353
pTNF-α-promoter-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3(6504-6523):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pTNF-α-promoter-luc的全序列信息: D2480-pTNF-α-promoter-luc-seq.txt
包装清单:
KL-2480-1μg
pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)
1μg
KL-2480-100μg
pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pTNF-α-promoter-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用信裕生物的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
4. LPS等是常见的可以激活TNF-α的转录的试剂,可以用作pTNF-α-promoter-luc报告基因检测时的阳性对照。