pRL-SV40-C (报告基因质粒)
pRL-SV40-C(报告基因质粒)是信裕生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行海肾萤光素酶(Renilla luciferase)报告基因检测的质粒,主要用于在其多克隆位点插入感兴趣的3' -UTR、启动子、增强子等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性,或用作萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)报告基因检测时的内参。也可以使用Bgl II和Pst I等位点切除SV40 early enhancer/promoter,以降低本底性的转录,并插入感兴趣的3' -UTR等调控元件研究该调控序列的基因转录调控活性。研究5' -UTR并希望使用海肾萤光素酶时,推荐使用D2762 pRL-SV40-N。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pRL-SV40-C质粒含有SV40早期增强子和启动子,可以实现海肾萤光素酶在哺乳动物细胞内高效表达。
pRL-SV40-C质粒携带renilla luciferase基因,编码分子量为36kD的海肾萤光素酶,翻译后无需修饰,常用于报告基因检测。
本质粒为氨苄抗性。
pRL-SV40-C质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
SV40 early enhancer/promoter
7-418
T7 RNA polymerase transcription(-17 to +2)
670-688
T7 RNA polymerase transcription initiation site
687
Rluc reporter gene
698-1633
Multiple cloning site
1635-1701
SV40 late polyadenylation signal
1781-1942
β-lactamase (Ampr) coding region
2079-2494
pRL-SV40-C质粒(3775bp)的图谱如下:
pRL-SV40-C的多克隆位点的详细图谱如下:
XhoI SacI MluI HindIII EcoRV SalI
1631
TAATTCTAGG
CTCGAGGAGC
TCACGCGTAA
GCTTGAATTC
GATATCGTCG
ATTAAGATCC
GAGCTCCTCG
AGTGCGCATT
CGAACTTAAG
CTATAGCAGC
1681
ACACTAGTGG
GCCCTCTAGA
GCTAGAGCGG
TGTGATCACC
CGGGAGATCT
CGATCTCGCC
pRL-SV40-C中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pRL-SV40-C)包括:
AgeI
AlwNI
ApaI
ApaLI
AscI
BbeI
BlpI
BpmI
BsaI
BsgCI
Bsp120I
BssHI
Bst1107I
Bsu36I
EagI
Eco47III
EcoNI
EheI
EspI
FseI
GsuI
KasI
MmeI
MscI
MslI
NarI
NdeI
NotI
NruI
NsiI
PstI
RsrI
SacII
SapI
SfiI
SphI
SrfI
StuI
TfiI
Tth111I
pRL-SV40-C中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pRL-SV40-C once)包括:
BglII
A`GATC,T
1
EcoO109I
RG`GNC,CY
1690
Acc65I
G`GTAC,C
54
ApaI
G,GGCC`C
1693
Asp718
G`GTAC,C
54
XbaI
T`CTAG,A
1695
KpnI
G,GTAC`C
58
NotI
GC`GGCC,GC
1708
PvuII
CAG|CTG
80
EagI
C`GGCC,G
1708
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
357
XmaIII
C`GGCC,G
1708
StuI
AGG|CCT
403
HpaI
GTT|AAC
1851
AvrII
C`CTAG,G
404
MunI
C`AATT,G
1860
PstI
C,TGCA`G
466
ClaI
AT`CG,AT
1946
BspMI
ACCTGC 10/14
480
BsaBI
GATNN|NNATC
1952
BsiCI
TT`CG,AA
704
BamHI
G`GATC,C
1953
BstBI
TT`CG,AA
704
SspI
AAT|ATT
2071
XcmI
CCANNNN,N`NNNNTGG
1347
Bsp1286I
G,DGCH`C
2293
BsrGI
A`CGCG,T
1396
AhaII
GR`CG,YC
2336
BsaAI
YAC|GTR
1430
BsaHI
GR`CG,YC
2336
AvaI
C`YCGR,G
1641
HinII
GR`CG,YC
2336
PaeR7I
C`TCGA,G
1641
PvuI
CG,AT`CG
2507
XhoI
C`TCGA,G
1641
EcoNI
CCTNN`N,NNAGG
2515
SacI
G,AGCT`C
1651
Cfr10I
R`CCGG,Y
2791
MluI
A`CGCG,T
1653
GsuI
CTGGAG 21/19
2806
HinDIII
A`AGCT,T
1659
BpmI
CTGGAG 22/20
2807
EcoRI
G`AATT,C
1665
AhdI
GACNN,N`NNGTC
2876
EcoRV
GAT|ATC
1673
PleI
GAGTC 9/10
2885
SalI
G`TCGA,C
1677
HgiEII
ACCNNNNNNGGT-1/13
3175
AccI
GT`MK,AC
1678
AlwNI
CAG,NNN`CTG
3355
SpeI
A`CTAG,T
1683
HaeII
R,GCGC`Y
3524
pRL-SV40-C质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T7 Primer(670-688):TAATACGACTCACTATAGG
pRL-SV40-C的全序列信息:D2768 pRL-SV40-C-seq.txt
包装清单:
KL-2768-1μg
pRL-SV40-C(报告基因质粒)
1μg
KL-2768-100μg
pRL-SV40-C(报告基因质粒)
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pRL-SV40-C质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入感兴趣的5’-UTR、启动子、增强子等调控元件,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
4. pRL-SV40-C质粒或使用该质粒构建的新质粒转染细胞后,后续可以采用信裕生物的海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG016/RG017)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)检测海肾荧光素酶的表达水平。