pAAT-promoter-luc (报告基因质粒)
pAAT-promoter-luc(报告基因质粒)是信裕生物自行研发的用于检测AAT promoter转录活性水平的报告基因质粒。
pAAT-promoter-luc是以信裕生物的pGL6质粒为模板,在其多克隆位点插入了human AAT的启动子序列,可以高灵敏度地检测AAT promoter的激活水平。
AAT(alpha 1-Antitrypsin或alpha-1 antiproteinase,也简称为A1AT),又称serine peptidase inhibitor,clade A,member 1或serine proteinase inhibitor,clade A,member 1(简称SERPINA1),是一种可以被分泌到细胞外的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可以抑制elastase、plasmin、thrombin、trypsin和chymotrypsin等。AAT基因缺陷时会导致肺气肿(emphysema)或肝脏疾病等。
pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pAAT-promoter-luc质粒的主要信息如下:
luc2 reporter gene
946-2598
SV40 late poly(A) signal
2633-2854
SV40 early enhancer/promoter
2902-3320
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region
3345-4139
Synthetic poly(A) signal
4164-4212
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region
4279-4298
ColE1-derived plasmid replication origin
4536
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
5327-6187
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site
6292-6445
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region
6394-6413
pAAT-promoter-luc质粒的图谱如下:
pAAT-promoter-luc的多克隆位点及AAT-promoter的详细图谱如下:
BglI KpnI AAT promoter BamHI
1
GGCCTAACTG
TCCCTGGTCT
GAATGTGTGT
CCGGATTGAC
AGGGACCAGA
CTTACACACA
51
CCTGTGGGTC
ACTCGCCTGG
TAGAGCCCCA
AGGTGGAGGC
GGACACCCAG
TGAGCGGACC
ATCTCGGGGT
TCCACCTCCG
101
CTGGTGAATG
ACAGAAGGGG
CAAAAATGCA
CTCATCCATT
GACCACTTAC
TGTCTTCCCC
GTTTTTACGT
GAGTAGGTAA
151
GTATCTACGG
CACGTACGCC
AGCTCCCAAG
CAGGTTTGCG
CATAGATGCC
GTGCATGCGG
TCGAGGGTTC
GTCCAAACGC
201
CGGGCGATGC
AATCTGATTT
AGGCTTTTAA
AGGGATTGCA
GCCCGCTACG
TTAGACTAAA
TCCGAAAATT
TCCCTAACGT
251
GCCCCACTAG
CCTCAACCCT
GTACCTCCCC
TCCCCTCCAC
CGGGGTGATC
GGAGTTGGGA
CATGGAGGGG
AGGGGAGGTG
301
CTCCAAAGGC
CTCCAACAAC
CCCAGAGTGG
GGGCCATGTA
GAGGTTTCCG
GAGGTTGTTG
GGGTCTCACC
CCCGGTACAT
351
CTCCAAGCTG
TATATGGATC
ACACTGGTTT
TCCAGGAGCA
GAGGTTCGAC
ATATACCTAG
TGTGACCAAA
AGGTCCTCGT
401
CAGGCCTGAG
GCTGGTCAAA
ATTGAACCTC
CTCCTGCTCT
GTCCGGACTC
CGACCAGTTT
TAACTTGGAG
GAGGACGAGA
451
GGGGGCAGAC
TAAGCAGAGG
GCTGTGCAGA
CCCACATAAA
CCCCCGTCTG
ATTCGTCTCC
CGACACGTCT
GGGTGTATTT
501
TGTGCCAGGC
ACTTCACCCG
AGGCACTTCA
CAAGCATGCT
ACACGGTCCG
TGAAGTGGGC
TCCGTGAAGT
GTTCGTACGA
551
ACTTCCAACT
CTTTGGGATG
CAGGTGAAAC
AGTTCCTGGT
TGAAGGTTGA
GAAACCCTAC
GTCCACTTTG
TCAAGGACCA
601
GAAGCGGCCT
GCCTGAGGCA
GCACAGCTCT
TCTTTACAGA
CTTCGCCGGA
CGGACTCCGT
CGTGTCGAGA
AGAAATGTCT
651
CACCTCTACC
CTGTCTCACG
GCCCCCCATG
CCAGCCTGAC
GTGGAGATGG
GACAGAGTGC
CGGGGGGTAC
GGTCGGACTG
701
GCCTCAGTCA
TGCTCCATTT
TTCCATCGGG
ACCATCAAGA
CGGAGTCAGT
ACGAGGTAAA
AAGGTAGCCC
TGGTAGTTCT
751
GTCTAAGGCT
GACTGGGTAA
CTTTGGATGA
GCGGTCTCTC
CAGATTCCGA
CTGACCCATT
GAAACCTACT
CGCCAGAGAG
801
CTGTTTCCTC
ATCTGTCAAA
TGGGCTCTAA
CCCACTCTGA
GACAAAGGAG
TAGACAGTTT
ACCCGAGATT
GGGTGAGACT
851
CGGCAGTAAG
TCTTCAGCAT
CAGGCATTTT
GGGGTGACTC
GCCGTCATTC
AGAAGTCGTA
GTCCGTAAAA
CCCCACTGAG
901
AGATCTGCAG
AAGCTTGGCA
ATCCGGTACT
GTTGGTAAAG
CCACCATGGA
TCTAGACGTC
TTCGAACCGT
TAGGCCATGA
CAACCATTTC
GGTGGTACCT
pAAT-promoter-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pAAT-promoter-luc)包括:
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
BspM II
BssH II
Eco72 I
EcoR I
EcoR V
Mlu I
Nde I
Nhe I
Nru I
PaeR7 I
PflM I
Pme I
Pml I
Psp1406 I
PspA I
Rsr II
Sac I
Sma I
SnaB I
Srf I
Tth111 I
pAAT-promoter-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pAAT-promoter-luc once)包括:
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
Mun I
C`AATT,G
2773
Acc65 I
G`GTAC,C
15
BsiC I
TT`CG,AA
4215
Asp718
G`GTAC,C
15
BstB I
TT`CG,AA
4215
Kpn I
G,GTAC`C
19
Sal I
G`TCGA,C
4229
BsaA I
YAC|GTR
164
Afl III
A`CRYG,T
4479
BsiW I
C`GTAC,G
164
ApaL I
G`TGCA,C
4793
Spl I
C`GTAC,G
164
Not I
GC`GGCC,GC
5299
Xcm I
CCANNNN,N`NNNNTGG
361
BstE II
G`GTNAC,C
5326
Xmn I
GAANN|NNTTC
581
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
5401
Bsa I
GGTCTC 7/11
790
Pvu I
CG,AT`CG
5771
Bgl II
A`GATC,T
902
Sac II
CC,GC`GG
5795
Hind III
A`AGCT,T
912
Bst1107 I
GTA|TAC
5911
BsrG I
T`GTAC,A
1437
Xca I
GTA|TAC
5911
Dra III
CAC,NNN`GTG
2093
Spe I
A`CTAG,T
6230
Apo I
R`AATT,Y
2709
BsmB I
CGTCTC 7/11
6243
pAAT-promoter-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3 (6394-6413):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pAAT-promoter-luc的全序列信息: D2306 pAAT-promoter-luc-seq.txt
包装清单:
KL-2306-1μg
pAAT-promoter-luc(报告基因质粒)
1μg
KL-2306-100μg
pAAT-promoter-luc(报告基因质粒)
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pAAT-promoter-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用信裕生物 的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
4. 可以激活AAT promoter的试剂,可以用作pAAT-promoter-luc报告基因检测时的阳性对照。