pSTAT3-TA-luc (报告基因质粒)
pSTAT3-TA-luc (报告基因质粒)是信裕生物自行研发的用于检测STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3)转录活性水平的报告基因质粒。pSTAT3-TA-luc是以信裕生物的pGL6-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个STAT3结合位点,可以高灵敏度地检测STAT3的激活水平。
pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pSTAT3-TA-luc质粒的主要信息如下:
STAT3 response element
32-86
Minimal TA promoter (pTA)
109-131
luc2 reporter gene
173-1825
SV40 late poly(A) signal
1860-2081
SV40 early enhancer/promoter
2129-2547
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region
2572-3366
Synthetic poly(A) signal
3391-3439
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region
3506-3525
ColE1-derived plasmid replication origin
3763
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
4554-5414
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site
5519-5672
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region
5621-5640
pSTAT3-TA-luc质粒的图谱如下:
pSTAT3-TA-luc的多克隆位点及STAT3 response element的详细图谱如下:
BglI KpnI NheI XhoI STAT3 response element
1
GGCCTAACTG
GCCGGTACCG
CTAGCCTCGA
CCGGATTGAC
CGGCCATGGC
GATCGGAGCT
51
CCCGAACGTT
GCTTCCCGAA
CGTTGCTTCC
CTGCAGAAGC
GGGCTTGCAA
CGAAGGGCTT
GCAACGAAGG
GACGTCTTCG
pSTAT3-TA-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pSTAT3-TA-luc)包括:
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
Bsa I
BsaA I
BsiW I
BspM II
BssH II
Eco72 I
EcoR I
EcoR V
Mlu I
Nde I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
PspA I
Rsr II
Sac I
Sma I
SnaB I
Spl I
Srf I
Tth111 I
Vsp I
Xcm I
Xma I
Xmn I
pSTAT3-TA-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pSTAT3-TA-luc once)包括:
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
BsiC I
TT`CG,AA
3442
Bgl I
GCCN,NNN`NGGC
9
BstB I
TT`CG,AA
3442
Acc65 I
G`GTAC,C
15
Sal I
G`TCGA,C
3456
Asp718
G`GTAC,C
15
Afl III
A`CRYG,T
3706
Kpn I
G,GTAC`C
19
ApaL I
G`TGCA,C
4020
Nhe I
G`CTAG,C
21
HgiE II
ACCNNNNNNGGT -1/13
4285
PaeR7 I
C`TCGA,G
27
Not I
GC`GGCC,GC
4526
Xho I
C`TCGA,G
27
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
4550
Bgl II
A`GATC,T
88
BstE II
G`GTNAC,C
4553
Hind III
A`AGCT,T
98
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
4628
BsrG I
T`GTAC,A
664
Bsu36 I
CC`TNA,GG
4984
Dra III
CAC,NNN`GTG
1320
Pvu I
CG,AT`CG
4998
Gsu I
CTGGAG 21/19
1553
Sac II
CC,GC`GG
5022
Bpm I
CTGGAG 22/20
1554
Bst1107 I
GTA|TAC
5138
Apo I
R`AATT,Y
1936
Xca I
GTA|TAC
5138
Mun I
C`AATT,G
2000
Spe I
A`CTAG,T
5457
BamH I
G`GATC,C
2093
BsmA I
GTCTC`/9
5469
Stu I
AGG|CCT
2526
BsmB I
CGTCTC 7/11
5470
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
3047
pSTAT3-TA-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3 (5621-5640):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pSTAT3-TA-luc的全序列信息: D2259 pSTAT3-TA-luc-seq.txt
包装清单:
KL-2259-1μg
pSTAT3-TA-luc (报告基因质粒)
1μg
KL-2259-100μg
pSTAT3-TA-luc (报告基因质粒)
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pSTAT3-TA-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用信裕生物的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/
RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
4. 可以激活STAT3的试剂,可以用作pSTAT3-TA-luc报告基因检测时的阳性对照。