pET-N-GST-Thrombin-C-His
pET-N-GST-Thrombin-C-His是一种用于表达N端含GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)或C端含His标签(His tag)的重组蛋白的原核表达质粒，也可用于表达N端含GST标签并且同时C端含His标签的重组蛋白。GST和His双标签有利于通过GST柱和镍柱两种方法来纯化目的蛋白，使目的蛋白的纯度更高。本质粒N端GST标签后有Thrombin酶切位点，可通过Thrombin蛋白酶切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列，后面有一个His标签的编码序列，后者含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据读码框插入不含终止密码子的目的基因就可以表达N端含有GST标签并且C端含有His标签的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加终止密码子，这样就可以表达仅在N端含有GST标签的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因，这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白。
本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS，对应的核酸序列为CTGGTTCCGCGTGGATCC，因此在目的蛋白纯化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。
通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)、GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)、BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)和His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒(5955bp)的图谱如下：
pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
Kanamycin resistance ORF
563-1645
LacI coding sequence
3518-4597
GST tag coding sequence
5076-5732
Thrombin recognition site sequence
5739-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
5751-5798
His tag coding sequence
5799-5816
pET-N-GST-Thrombin-C-His的多克隆位点的详细图谱如下：
5026
AATTCCCCTC TAGAAATAAT TTTGTTTAAC TTTAAGAAGG AGATATACAT
TTAAGGGGAG ATCTTTATTA AAACAAATTG AAATTCTTCC TCTATATGTA
5076
ATGATGTCCC CTATACTAGG TTATTGGAAA ATTAAGGGCC TTGTGCAACC
TACTACAGGG GATATGATCC AATAACCTTT TAATTCCCGG AACACGTTGG
5126
CACTCGACTT CTTTTGGAAT ATCTTGAAGA AAAATATGAA GAGCATTTGT
GTGAGCTGAA GAAAACCTTA TAGAACTTCT TTTTATACTT CTCGTAAACA
5176
ATGAGCGCGA TGAAGGTGAT AAATGGCGAA ACAAAAAGTT TGAATTGGGT
TACTCGCGCT ACTTCCACTA TTTACCGCTT TGTTTTTCAA ACTTAACCCA
5226
TTGGAGTTTC CCAATCTTCC TTATTATATT GATGGTGATG TTAAATTAAC
AACCTCAAAG GGTTAGAAGG AATAATATAA CTACCACTAC AATTTAATTG
5276
ACAGTCTATG GCCATCATAC GTTATATAGC TGACAAGCAC AACATGTTGG
TGTCAGATAC CGGTAGTATG CAATATATCG ACTGTTCGTG TTGTACAACC
5326
GTGGTTGTCC AAAAGAGCGT GCAGAGATTT CAATGCTTGA AGGAGCGGTT
CACCAACAGG TTTTCTCGCA CGTCTCTAAA GTTACGAACT TCCTCGCCAA
5376
TTGGATATTA GATACGGTGT TTCGAGAATT GCATATAGTA AAGACTTTGA
AACCTATAAT CTATGCCACA AAGCTCTTAA CGTATATCAT TTCTGAAACT
5426
AACTCTCAAA GTTGATTTTC TTAGCAAGCT ACCTGAAATG CTGAAAATGT
TTGAGAGTTT CAACTAAAAG AATCGTTCGA TGGACTTTAC GACTTTTACA
5476
TCGAAGATCG TTTATGTCAT AAAACATATT TAAATGGTGA TCATGTAACC
AGCTTCTAGC AAATACAGTA TTTTGTATAA ATTTACCACT AGTACATTGG
5526
CATCCTGACT TCATGTTGTA TGACGCTCTT GATGTTGTTT TATACATGGA
GTAGGACTGA AGTACAACAT ACTGCGAGAA CTACAACAAA ATATGTACCT
5576
CCCAATGTGC CTGGATGCGT TCCCAAAATT AGTTTGTTTT AAAAAACGTA
GGGTTACACG GACCTACGCA AGGGTTTTAA TCAAACAAAA TTTTTTGCAT
5626
TTGAAGCTAT CCCACAAATT GATAAGTACT TGAAATCCAG CAAGTATATA
AACTTCGATA GGGTGTTTAA CTATTCATGA ACTTTAGGTC GTTCATATAT
5676
GCATGGCCTT TGCAGGGCTG GCAAGCCACG TTTGGTGGTG GCGACCATCC
CGTACCGGAA ACGTCCCGAC CGTTCGGTGC AAACCACCAC CGCTGGTAGG
5726
TCCAAAATCG GATCTGGTTC CGCGTGGATC CAAGCTTCTG CAGGAATTCG
AGGTTTTAGC CTAGACCAAG GCGCACCTAG GTTCGAAGAC GTCCTTAAGC
5776
ATATCGTCGA CAGATCTCTC GAGCACCACC ACCACCACCA CTGAGATCCG
TATAGCAGCT GTCTAGAGAG CTCGTGGTGG TGGTGGTGGT GACTCTAGGC
pET-N-GST-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括：
AatII
Acc65I
AflII
AgeI
AhdI
AleI
AscI
AvrII
BaeI
BbvCI
BfuAI
BmgBI
BmtI
BsaI
BseRI
BsiWI
BspMI
BsrGI
Bsu36I
CspCI
EagI
Eco53kI
FseI
KpnI
MfeI
NcoI
NheI
NotI
PacI
PmeI
PmlI
PspXI
RsrII
SacI
SacII
SbfI
SexAI
SfiI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
pET-N-GST-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括：
DraIII
CAC,NNN`GTG
242
BstEII
G`GTNAC,C
4060
PsiI
TTA|TAA
370
MluI
A`CGCG,T
4242
PvuI
CG,AT`CG
943
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
4563
AsiSI
GCG,AT`CGC
943
SphI
G,CATG`C
4771
SmaI
CCC|GGG
1067
SgrAI
CR`CCGG,YG
4923
XmaI
C`CCGG,G
1067
XbaI
T`CTAG,A
5034
TspMI
C`CCGG,G
1069
NdeI
CA`TA,TG
5074
NruI
TCG|CGA
1286
MscI
TGG|CCA
5286
AcuI
CTGAAG(N)14,NN`
1597
BstBI
TT`CG,AA
5476
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1729
SwaI
ATTT|AAAT
5506
BssSI
C`ACGA,G
1968
ScaI
AGT|ACT
5652
BstZ17I
GTA|TAC
2374
BamHI
G`GATC,C
5751
Tth111I
GACN`N,NGTC
2399
HindIII
A`AGCT,T
5757
PflFI
GACN`N,NGTC
2399
PstI
C,TGCA`G
5763
PpuMI
RG`GWC,CY
3136
EcoRI
G`AATT,C
5769
FspI
TGC|GCA
3164
EcoRV
GAT|ATC
5777
BglI
GCCN,NNN`NGGC
3182
SalI
G`TCGA,C
5781
PshAI
GACNN|NNGTC
3401
BglII
A`GATC,T
5787
HpaI
GTT|AAC
3740
XhoI
C`TCGA,G
5793
BssHII
G`CGCG,C
3831
PaeR7I
C`TCGA,G
5793
ApaI
G,GGCC`C
4035
BlpI
GC`TNA,GC
5872
PspOMI
G`GGCC,C
4035
StyI
C`CWWG,G
5894
NmeAIII
GCCGAG(N)19,NN`
4041
pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer (5869-5888): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-GST-Thrombin-C-His的全序列信息：D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His.txt。
包装清单：
KL-2911-1μg
pET-N-GST-Thrombin-C-His
1μg
KL-2911-100μg
pET-N-GST-Thrombin-C-His
100μg
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
