pET-N-GST-PreScission
pET-N-GST-PreScission是一种用于表达N端含有GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)的目的蛋白的原核表达质粒。本质粒N端GST标签后含有PreScission酶切位点，可通过PreScission Protease (P2302/P2303)切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
本质粒含有T7启动子/lac操纵子，可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列。因此在多克隆位点根据读码框插入目的基因就可以表达N端含有GST标签的目的蛋白。
本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有PreScission蛋白酶识别的八肽序列LEVLFQGP，对应的核酸序列为CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白纯化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST标签。PreScission蛋白酶酶切发生在八肽序列的Q和G之间，因此在酶切去除GST标签的时候目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GP。
通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)等纯化本质粒表达的目的蛋白，也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
pET-N-GST-PreScission质粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
Kanamycin resistance ORF
563-1645
LacI coding sequence
3518-4597
GST tag coding sequence
5076-5732
PreScission recognition site sequence
5733-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
5757-5804
pET-N-GST-PreScission质粒(5943bp)的图谱如下：
pET-N-GST-PreScission的多克隆位点的详细图谱如下：
5026
AATTCCCCTC
TAGAAATAAT
TTTGTTTAAC
TTAAGGGGAG
ATCTTTATTA
AAACAAATTG
5076
ATGATGTCCC
CTATACTAGG
TTATTGGAAA
ATTAAGGGCC
TTGTGCAACC
TACTACAGGG
GATATGATCC
AATAACCTTT
TAATTCCCGG
AACACGTTGG
5126
CACTCGACTT
CTTTTGGAAT
ATCTTGAAGA
AAAATATGAA
GAGCATTTGT
GTGAGCTGAA
GAAAACCTTA
TAGAACTTCT
TTTTATACTT
CTCGTAAACA
5176
ATGAGCGCGA
TGAAGGTGAT
AAATGGCGAA
ACAAAAAGTT
TGAATTGGGT
TACTCGCGCT
ACTTCCACTA
TTTACCGCTT
TGTTTTTCAA
ACTTAACCCA
5226
TTGGAGTTTC
CCAATCTTCC
TTATTATATT
GATGGTGATG
TTAAATTAAC
AACCTCAAAG
GGTTAGAAGG
AATAATATAA
CTACCACTAC
AATTTAATTG
5276
ACAGTCTATG
GCCATCATAC
GTTATATAGC
TGACAAGCAC
AACATGTTGG
TGTCAGATAC
CGGTAGTATG
CAATATATCG
ACTGTTCGTG
TTGTACAACC
5326
GTGGTTGTCC
AAAAGAGCGT
GCAGAGATTT
CAATGCTTGA
AGGAGCGGTT
CACCAACAGG
TTTTCTCGCA
CGTCTCTAAA
GTTACGAACT
TCCTCGCCAA
5376
TTGGATATTA
GATACGGTGT
TTCGAGAATT
GCATATAGTA
AAGACTTTGA
AACCTATAAT
CTATGCCACA
AAGCTCTTAA
CGTATATCAT
TTCTGAAACT
5426
AACTCTCAAA
GTTGATTTTC
TTAGCAAGCT
ACCTGAAATG
CTGAAAATGT
TTGAGAGTTT
CAACTAAAAG
AATCGTTCGA
TGGACTTTAC
GACTTTTACA
5476
TCGAAGATCG
TTTATGTCAT
AAAACATATT
TAAATGGTGA
TCATGTAACC
AGCTTCTAGC
AAATACAGTA
TTTTGTATAA
ATTTACCACT
AGTACATTGG
5526
CATCCTGACT
TCATGTTGTA
TGACGCTCTT
GATGTTGTTT
TATACATGGA
GTAGGACTGA
AGTACAACAT
ACTGCGAGAA
CTACAACAAA
ATATGTACCT
5576
CCCAATGTGC
CTGGATGCGT
TCCCAAAATT
AGTTTGTTTT
AAAAAACGTA
GGGTTACACG
GACCTACGCA
AGGGTTTTAA
TCAAACAAAA
TTTTTTGCAT
5626
TTGAAGCTAT
CCCACAAATT
GATAAGTACT
TGAAATCCAG
CAAGTATATA
AACTTCGATA
GGGTGTTTAA
CTATTCATGA
ACTTTAGGTC
GTTCATATAT
5676
GCATGGCCTT
TGCAGGGCTG
GCAAGCCACG
TTTGGTGGTG
GCGACCATCC
CGTACCGGAA
ACGTCCCGAC
CGTTCGGTGC
AAACCACCAC
CGCTGGTAGG
5726
GAAGTTCTGT
TCCAGGGGCC
CGGATCCAAG
CTTCTGCAGG
CTTCAAGACA
AGGTCCCCGG
GCCTAGGTTC
GAAGACGTCC
5776
AATTCGATAT
CGTCGACAGA
TCTCTCGAGT
GAGATCCGGC
TGCTAACAAA
TTAAGCTATA
GCAGCTGTCT
AGAGAGCTCA
CTCTAGGCCG
ACGATTGTTT
pET-N-GST-PreScission中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-PreScission)包括：
AatII
Acc65I
AflII
AgeI
AhdI
AleI
AscI
AvrII
BaeI
BbvCI
BfuAI
BmgBI
BmtI
BsaI
BseRI
BsiWI
BspMI
BsrGI
Bsu36I
CspCI
EagI
Eco53kI
FseI
KpnI
MfeI
NcoI
NheI
NotI
PacI
PmeI
PmlI
PspXI
RsrII
SacI
SacII
SbfI
SexAI
SfiI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
pET-N-GST-PreScission中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-PreScission once)包括：
DraIII
CAC,NNN`GTG
242
MluI
A`CGCG,T
4242
PsiI
TTA|TAA
370
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
4563
PvuI
CG,AT`CG
943
SphI
G,CATG`C
4771
AsiSI
GCG,AT`CGC
943
SgrAI
CR`CCGG,YG
4923
SmaI
CCC|GGG
1067
XbaI
T`CTAG,A
5034
XmaI
C`CCGG,G
1067
NdeI
CA`TA,TG
5074
TspMI
C`CCGG,G
1069
MscI
TGG|CCA
5286
NruI
TCG|CGA
1286
BstBI
TT`CG,AA
5476
AcuI
CTGAAG(N)14,NN`
1597
SwaI
ATTT|AAAT
5506
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1729
ScaI
AGT|ACT
5652
BssSI
C`ACGA,G
1968
BamHI
G`GATC,C
5757
BstZ17I
GTA|TAC
2374
HindIII
A`AGCT,T
5763
Tth111I
GACN`N,NGTC
2399
PstI
C,TGCA`G
5769
PflFI
GACN`N,NGTC
2399
EcoRI
G`AATT,C
5775
PpuMI
RG`GWC,CY
3136
EcoRV
GAT|ATC
5783
FspI
TGC|GCA
3164
SalI
G`TCGA,C
5787
BglI
GCCN,NNN`NGGC
3182
BglII
A`GATC,T
5793
PshAI
GACNN|NNGTC
3401
XhoI
C`TCGA,G
5799
HpaI
GTT|AAC
3740
PaeR7I
C`TCGA,G
5799
BssHII
G`CGCG,C
3831
BlpI
GC`TNA,GC
5860
NmeAIII
GCCGAG(N)19,NN`
4041
StyI
C`CWWG,G
5882
pET-N-GST-PreScission质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer (5857-5876): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-GST-PreScission的全序列信息：D2916 pET-N-GST-PreScission.txt。
包装清单：
KL-2916-1μg
pET-N-GST-PreScission
1μg
KL-2916-100μg
pET-N-GST-PreScission
100μg
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
