pUCm-T载体
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片段的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3'端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经线性化的载体，载体每条链的3'端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片段的重组载体。
M13/pUC Reverse Primer
204-221
Multiple cloning region
233-376
M13/pUC Sequencing Primer
378-395
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region
972-1832
ColE1 origin of replication(rep)
1987-2606
pUCm-T载体的图谱如图1：
图1. pUCm-T载体图谱示意图
pUCm-T载体的多克隆位点的详细序列如下(请特别注意其中的Pst I不是单酶切位点)：
201
ACACAGGAAA
CAGCTATGAC
CATGATTACG
CCAAGCTTGC
ATGCCTGCAG
TGTGTCCTTT
GTCGATACTG
GTACTAATGC
GGTTCGAACG
TACGGACGTC
251
GTCGACTCTA
GACTCGAGGG
ATCCAGATCT
CCAGTCTT GA
CCTGGTCTGC
CAGCTGAGAT
CTGAGCTCCC
TAGGTCTAGA
GGTCAGA TCT
GGACCAGACG
301
AGGCGGCCGC
CCATGGGATA
TCATCGATCA
TCCGCCGGCG
GGTACCCTAT
AGTAGCTAGT
351
CGTATTACGG
TACCGAGCTC
GAATTCACTG
GCCGTCGTTT
TACAACGTCG
GCATAATGCC
ATGGCTCGAG
CTTAAGTGAC
CGGCAGCAAA
ATGTTGCAGC
pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T)包括：
Afl II
Age I
Apa I
Asc I
Avr II
Bbs I
Bbv II
Bcl I
Blp I
BsaA I
BseR I
Bsg I
BsiC I
BsiW I
Bsm I
BsmF I
Bsp120 I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstB I
BstE II
BstX I
Bsu36 I
Dra III
Eco47 III
Eco72 I
Esp I
Fse I
Hpa I
Mlu I
Msc I
Mun I
Nae I
NgoM I
Nhe I
Nru I
Nsi I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
PspA I
Rsr II
Sac II
Sfi I
Sma I
SnaB I
Spe I
Spl I
Srf I
Stu I
Xca I
Xma I
pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T once)包括：
HinD IIIA`AGCT,T234Acc65 IG`GTAC,C360BspM IACCTGC 10/14239Asp718G`GTAC,C360Sph IG,CATG`C244Kpn IG,GTAC`C364Sal IG`TCGA,C252Ban IIG,RGCY`C370Acc IGT`MK,AC253Sac IG,AGCT`C370HinC IIGTY|RAC254Apo IR`AATT,Y372Hind IIGTY|RAC254EcoR IG`AATT,C372Xba IT`CTAG,A258Kas IG`GCGC,C533Ava IC`YCGR,G264Nar IGG`CG,CC534PaeR7 IC`TCGA,G264Ehe IGGC|GCC535Xho IC`TCGA,G264Bbe IG,GCGC`C537BamH IG`GATC,C270EcoO109 IRG`GNC,CY780BsaB IGATNN|NNATC275Aat IIG,ACGT`C841Bgl IIA`GATC,T276Ssp IAAT|ATT955Xcm ICCANNNN,N`NNNNTGG289Xmn IGAANN|NNTTC1160Tth111 IGACN`N,NGTC293Bsp1286 IG,DGCH`C1177Not IGC`GGCC,GC305Sca IAGT|ACT1279Eag IC`GGCC,G305EcoN ICCTNN`N,NNAGG1399Xma IIIC`GGCC,G305Cfr10 IR`CCGG,Y1675Dsa IC`CRYG,G312Bsa IGGTCTC 7/111694Nco IC`CATG,G312Ahd IGACNN,N`NNGTC1760Sty IC`CWWG,G312AlwN ICAG,NNN`CTG2239EcoR VGAT|ATC320Afl IIIA`CRYG,T2648Cla IAT`CG,AT325Sap IGCTCTTC 8/112765
pUCm-T载体的全序列信息： D2006 pUCm-T vector-seq.txt
pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自连的载体转化得到的克隆由于编码了LacZ基因，而在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色。大部分重组的载体，由于插入片段破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上转化得到白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆，蓝白斑筛选结果示意图如图2。
图2. pUCm-T载体的蓝白斑筛选结果示意图。pUCm-T载体和PCR产物片段进行连接，转化后在IPTG/X-Gal平板的上长出的克隆，其中白色克隆代表PCR产物片段可能插入到pUCm-T载体中，但后续还需要酶切、PCR或者测序确认。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单：
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3'端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3'端加A的反应，再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
