pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白)
pCMV-N-mCherry是信裕生物自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含mCherry (DsRed的突变体,一种非常明亮的红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个mCherry的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有mCherry标签的融合蛋白。利用mCherry的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用mCherry抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。mCherry与GFP没有序列同源性,不能使用GFP抗体检测mCherry。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-mCherry质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
Multiple cloning site
1385-1474
T7 promoter and T7 primer binding site
1494-1515
SV40 polyA signal
1527-1910
f1 origin of ss-DNA replication
2048-2354
Neomycin/kanamycin resistance ORF
2896-3687
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3688-4146
pCMV-N-mCherry质粒(4994bp)的图谱如下:
pCMV-N-mCherry的多克隆位点的详细图谱如下:
651
GAGCTCTAGC
GCTACCGGTC
TGAGCAAGGG
CTCGAGATCG
CGATGGCCAG
ACTCGTTCCC
701
AACATGGCCA
TCATCAAGGA
GTTCATGCGC
TTCAAGGTGC
TTGTACCGGT
AGTAGTTCCT
CAAGTACGCG
AAGTTCCACG
751
CTCCGTGAAC
GGCCACGAGT
TCGAGATCGA
GGGCGAGGGC
GAGGCACTTG
CCGGTGCTCA
AGCTCTAGCT
CCCGCTCCCG
801
CCTACGAGGG
CACCCAGACC
GCCAAGCTGA
AGGTGACCAA
GGATGCTCCC
GTGGGTCTGG
CGGTTCGACT
TCCACTGGTT
851
CTGCCCTTCG
CCTGGGACAT
CCTGTCCCCT
CAGTTCATGT
GACGGGAAGC
GGACCCTGTA
GGACAGGGGA
GTCAAGTACA
901
GGCCTACGTG
AAGCACCCCG
CCGACATCCC
CGACTACTTG
CCGGATGCAC
TTCGTGGGGC
GGCTGTAGGG
GCTGATGAAC
951
TCCCCGAGGG
CTTCAAGTGG
GAGCGCGTGA
TGAACTTCGA
AGGGGCTCCC
GAAGTTCACC
CTCGCGCACT
ACTTGAAGCT
1001
GTGGTGACCG
TGACCCAGGA
CTCCTCCCTG
CAGGACGGCG
CACCACTGGC
ACTGGGTCCT
GAGGAGGGAC
GTCCTGCCGC
1051
CAAGGTGAAG
CTGCGCGGCA
CCAACTTCCC
CTCCGACGGC
GTTCCACTTC
GACGCGCCGT
GGTTGAAGGG
GAGGCTGCCG
1101
AGAAGAAGAC
CATGGGCTGG
GAGGCCTCCT
CCGAGCGGAT
TCTTCTTCTG
GTACCCGACC
CTCCGGAGGA
GGCTCGCCTA
1151
GACGGCGCCC
TGAAGGGCGA
GATCAAGCAG
AGGCTGAAGC
CTGCCGCGGG
ACTTCCCGCT
CTAGTTCGTC
TCCGACTTCG
1201
CGGCCACTAC
GACGCTGAGG
TCAAGACCAC
CTACAAGGCC
GCCGGTGATG
CTGCGACTCC
AGTTCTGGTG
GATGTTCCGG
1251
TGCAGCTGCC
CGGCGCCTAC
AACGTCAACA
TCAAGTTGGA
ACGTCGACGG
GCCGCGGATG
TTGCAGTTGT
AGTTCAACCT
1301
CACAACGAGG
ACTACACCAT
CGTGGAACAG
TACGAACGCG
GTGTTGCTCC
TGATGTGGTA
GCACCTTGTC
ATGCTTGCGC
1351
CCACTCCACC
GGCGGCATGG
ACGAGCTGTA
AAGCTTCTGC
GGTGAGGTGG
CCGCCGTACC
TGCTCGACAT
TTCGAAGACG
EcoRIEcoRVSalIBglIIXhoIXbaISpeIApaI
1401
AGGAATTCGA
TATCGTCGAC
AGATCTCTCG
AGTCTAGAAC
TAGTGGGCCC
TCCTTAAGCT
ATAGCAGCTG
TCTAGAGAGC
TCAGATCTTG
ATCACCCGGG
pCMV-N-mCherry中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-mCherry)包括:
AclI
AflII
AscI
AsiSI
BaeI
BcgI
BlpI
BmgBI
BsiWI
BsmBI
BspEI
BspQI
BssHII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
FseI
NotI
NruI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspXI
SacII
SapI
ScaI
SmaI
SwaI
TspMI
XmaI
XmnI
pCMV-N-mCherry中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-mCherry once)包括:
NdeI
CA`TA,TG
240
BglII
A`GATC,T
1421
SnaBI
TAC|GTA
346
PaeR7I
C`TCGA,G
1427
CspCI
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
382
XhoI
C`TCGA,G
1427
NheI
G`CTAG,C
597
XbaI
T`CTAG,A
1433
BmtI
G,CTAG`C
597
SpeI
A`CTAG,T
1439
SacI
G,AGCT`C
651
PspOMI
G`GGCC,C
1445
Eco53kI
GAG|CTC
653
ApaI
G,GGCC`C
1445
AfeI
AGC|GCT
660
PvuI
CG,AT`CG
1525
AgeI
A`CCGG,T
664
BclI
T`GATC,A
1681
AhdI
GACNN,N`NNGTC
871
MfeI
C`AATT,G
1774
SbfI
CC,TGCA`GG
1032
HpaI
GTT|AAC
1787
BbsI
GAAGACNN`NNNN,
1112
BtsI
GCAGTG,NN`
1861
PflMI
CCAN,NNN`NTGG
1113
MluI
A`CGCG,T
1910
BbvCI
CC`TCA,GC
1215
DraIII
CAC,NNN`GTG
2137
Bpu10I
CC`TNA,GC
1215
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
2796
BsgI
GTGCAG(N)14,NN`
1269
ClaI
AT`CG,AT
2864
SgrAI
CR`CCGG,YG
1358
BspDI
AT`CG,AT
2864
XcmI
CCANNNN,N`NNNNTGG
1362
EagI
C`GGCC,G
2930
BsrGI
T`GTAC,A
1377
Tth111I
GACN`N,NGTC
3142
BamHI
G`GATC,C
1385
PflFI
GACN`N,NGTC
3142
HindIII
A`AGCT,T
1391
BsrDI
GCAATG,NN`
3257
EcoRI
G`AATT,C
1403
RsrII
CG`GWC,CG
3540
EcoRV
GAT|ATC
1411
BstBI
TT`CG,AA
3706
SalI
G`TCGA,C
1415
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
4013
AccI
GT`MK,AC
1416
PciI
A`CATG,T
4942
pCMV-N-mCherry质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
N-mCherry primer (1284-1303): 5′-AGTTGGACATCACCTCCCAC-3′
T7 primer (1494-1515): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
pCMV-N-mCherry的全序列信息:D2711 pCMV-N-mCherry-seq.txt
pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。
图1. pCMV-N-mCherry质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。
包装清单:
KL-2711-1μg
pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白)
1μg
KL-2711-100μg
pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白)
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。