pCMV-N-Flag
pCMV-N-Flag是信裕生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Flag标签的序列,因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-Flag质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
multiple cloning site
705-778
T7 promoter and T7 primer binding site
821-842
SV40 polyA signal
854-1237
f1 origin of ss-DNA replication
1375-1681
neomycin/kanamycin resistance ORF
2223-3014
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal
3015-3473
pCMV-N-Flag质粒的图谱如下:
pCMV-N-Flag的多克隆位点的详细图谱如下:
651
GAGCTCCACC
GCGGTGGCGG
TTACAAGGAT
CTCGAGGTGG
CGCCACCGCC
AATGTTCCTA
SmaI BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII
701
CGGATCCAAG
CTTCTGCAGG
AATTCGATAT
CGTCGACAGA
GCCTAGGTTC
GAAGACGTCC
TTAAGCTATA
GCAGCTGTCT
751
TCTCTCGAGT
CTAGAACTAG
TGGGCCCGGT
ACCTTAATTA
ATTAAGGTAC
AGAGAGCTCA
GATCTTGATC
ACCCGGGCCA
TGGAATTAAT
TAATTCCATG
pCMV-N-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Flag)包括:
Afl II
Age I
Ahd I
Asc I
Bbs I
Bbv II
Blp I
Bsg I
BsiW I
BsmB I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstE II
Ear I
Eco47 III
Eco72 I
EcoN I
Esp I
Fse I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
Psp1406 I
Sap I
pCMV-N-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Flag once)包括:
Nde I
CA`TA,TG
241
Pvu I
CG,AT`CG
855
SnaB I
TAC|GTA
347
Bcl I
T`GATC,A
1009
Nhe I
G`CTAG,C
598
Mun I
C`AATT,G
1102
Sac I
G,AGCT`C
656
Hpa I
GTT|AAC
1115
Sac II
CC,GC`GG
663
Mlu I
A`CGCG,T
1238
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
664
Dra III
CAC,NNN`GTG
1468
Not I
GC`GGCC,GC
669
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
2127
PspA I
C`CCGG,G
706
BseR I
GAGGAG 16/14
2170
Xma I
C`CCGG,G
706
Stu I
AGG|CCT
2173
Srf I
GCCC|GGGC
708
Cla I
AT`CG,AT
2192
Sma I
CCC|GGG
708
Kas I
G`GCGC,C
2351
BamH I
G`GATC,C
713
Nar I
GG`CG,CC
2352
Hind III
A`AGCT,T
719
Ehe I
GGC|GCC
2353
Pst I
C,TGCA`G
729
Bbe I
G,GCGC`C
2355
EcoR I
G`AATT,C
731
Msc I
TGG|CCA
2434
EcoR V
GAT|ATC
739
Tth111 I
GACN`N,NGTC
2470
Sal I
G`TCGA,C
743
BsrD I
GCAATG, 8
2585
Acc I
GT`MK,AC
744
Bsp1286 I
G,DGCH`C
2655
Bgl II
A`GATC,T
749
Rsr II
CG`GWC,CG
2868
PaeR7 I
C`TCGA,G
755
BsiC I
TT`CG,AA
3034
Xho I
C`TCGA,G
755
BstB I
TT`CG,AA
3034
Xba I
T`CTAG,A
761
Bsa I
GGTCTC 7/11
3341
Spe I
A`CTAG,T
767
HgiE II
ACCNNNNNNGGT-1/13
3681
Bsp120 I
G`GGCC,C
773
ApaL I
G`TGCA,C
3956
pCMV-N-Flag质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(821-842): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-Flag的全序列信息:D2722 pCMV-N-Flag-seq.txt
包装清单:
KL-2722-1μg
pCMV-N-Flag
1μg
KL-2722-001μg
pCMV-N-Flag
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。