pCMV-N-HA
pCMV-N-HA是信裕生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-HA质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620–639
multiple cloning site
708–781
T7 promoter and T7 primer binding site
824–845
SV40 polyA signal
857–1240
f1 origin of ss-DNA replication
1378–1684
neomycin/kanamycin resistance ORF
2226–3017
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3018–3476
pCMV-N-HA质粒的图谱如下:
pCMV-N-HA的多克隆位点的详细图谱如下:
651
GAGCTCCACC
GCGGTGGCGG
CCCATACGAT
CTCGAGGTGG
CGCCACCGCC
GGGTATGCTA
A SmaI BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI
701
GGGCGGATCC
AAGCTTCTGC
AGGAATTCGA
TATCGTCGAC
CCCGCCTAGG
TTCGAAGACG
TCCTTAAGCT
ATAGCAGCTG
751
AGATCTCTCG
AGTCTAGAAC
TAGTGGGCCC
GGTACCTTAA
TTAATTAAGG
TCTAGAGAGC
TCAGATCTTG
ATCACCCGGG
CCATGGAATT
AATTAATTCC
pCMV-N-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-HA)包括:
Afl II
Age I
Ahd I
Asc I
Bbs I
Bbv II
Blp I
Bsg I
BsiW I
BsmB I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstE II
Ear I
Eco47 III
Eco72 I
EcoN I
Esp I
Fse I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
Psp1406 I
Sap I
pCMV-N-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-HA once)包括:
Nde I
CA`TA,TG
241
Pvu I
CG,AT`CG
858
SnaB I
TAC|GTA
347
Bcl I
T`GATC,A
1012
Sac I
G,AGCT`C
656
Mun I
C`AATT,G
1105
Sac II
CC,GC`GG
663
Hpa I
GTT|AAC
1118
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
664
Mlu I
A`CGCG,T
1241
Not I
GC`GGCC,GC
669
Dra III
CAC,NNN`GTG
1471
PspA I
C`CCGG,G
709
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
2130
Xma I
C`CCGG,G
709
BseR I
GAGGAG 16/14
2173
Srf I
GCCC|GGGC
711
Stu I
AGG|CCT
2176
Sma I
CCC|GGG
711
Cla I
AT`CG,AT
2195
BamH I
G`GATC,C
716
Kas I
G`GCGC,C
2354
Hind III
A`AGCT,T
722
Nar I
GG`CG,CC
2355
Pst I
C,TGCA`G
732
Ehe I
GGC|GCC
2356
EcoR I
G`AATT,C
734
Bbe I
G,GCGC`C
2358
EcoR V
GAT|ATC
742
Msc I
TGG|CCA
2437
Sal I
G`TCGA,C
746
Tth111 I
GACN`N,NGTC
2473
Acc I
GT`MK,AC
747
BsrD I
GCAATG, 8
2588
Bgl II
A`GATC,T
752
Bsp1286 I
G,DGCH`C
2658
PaeR7 I
C`TCGA,G
758
Rsr II
CG`GWC,CG
2871
Xho I
C`TCGA,G
758
BsiC I
TT`CG,AA
3037
Xba I
T`CTAG,A
764
BstB I
TT`CG,AA
3037
Spe I
A`CTAG,T
770
Bsa I
GGTCTC 7/11
3344
Bsp120 I
G`GGCC,C
776
HgiE II
ACCNNNNNNGGT-1/13
3684
Apa I
G,GGCC`C
780
ApaL I
G`TGCA,C
3959
pCMV-N-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer (620–639): 5′ AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer (824-845): 5′ GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-HA的全序列信息: D2733 pCMV-N-HA-seq.txt
包装清单:
KL-2733-1μg
pCMV-N-HA
1μg
KL-2733-100μg
pCMV-N-HA
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。