pCMV-N-His
pCMV-N-His是信裕生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和His tag(His标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码His标签的序列,因此可以表达出含有His标签的融合蛋白,可以方便地使用抗His的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-His质粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
multiple cloning site
699-772
T7 promoter and T7 primer binding site
815-836
SV40 polyA signal
847-1230
f1 origin of ss-DNA replication
1368-1674
neomycin/kanamycin resistance ORF
2216-3007
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3008-3466
pCMV-N-His质粒的图谱如下:
pCMV-N-His的多克隆位点的详细图谱如下:
651
GAGCTCCACC
GCGGTGGCGG
TCATCACCAT
CTCGAGGTGG
CGCCACCGCC
AGTAGTGGTA
BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII XhoI
701
CGGGCGGATC
CAAGCTTCTG
CAGGAATTCG
ATATCGTCGA
CAGATCTCTC
GCCCGCCTAG
GTTCGAAGAC
GTCCTTAAGC
TATAGCAGCT
GTCTAGAGAG
751
GAGTCTAGAA
CTAGTGGGCC
CGGTACCTTA
ATTAATTAAG
GTACCAGGTA
CTCAGATCTT
GATCACCCGG
GCCATGGAAT
TAATTAATTC
CATGGTCCAT
pCMV-N-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-His)包括:
Afl II
Age I
Ahd I
Asc I
Bbs I
Bbv II
Blp I
Bsg I
BsiW I
BsmB I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstE II
Ear I
Eco47 III
Eco72 I
EcoN I
Esp I
Fse I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
Psp1406 I
Sap I
pCMV-N-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-His once)包括:
Nde I
CA`TA,TG
241
Pvu I
CG,AT`CG
849
SnaB I
TAC|GTA
347
Bcl I
T`GATC,A
1003
Nhe I
G`CTAG,C
598
Mun I
C`AATT,G
1096
Sac I
G,AGCT`C
656
Hpa I
GTT|AAC
1109
Sac II
CC,GC`GG
663
Mlu I
A`CGCG,T
1232
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
664
Dra III
CAC,NNN`GTG
1462
Not I
GC`GGCC,GC
669
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
2121
PspA I
C`CCGG,G
700
BseR I
GAGGAG 16/14
2164
Xma I
C`CCGG,G
700
Stu I
AGG|CCT
2167
Srf I
GCCC|GGGC
702
Cla I
AT`CG,AT
2186
Sma I
CCC|GGG
702
Kas I
G`GCGC,C
2345
BamH I
G`GATC,C
707
Nar I
GG`CG,CC
2346
Hind III
A`AGCT,T
713
Ehe I
GGC|GCC
2347
Pst I
C,TGCA`G
723
Bbe I
G,GCGC`C
2349
EcoR I
G`AATT,C
725
Msc I
TGG|CCA
2428
EcoR V
GAT|ATC
733
Tth111 I
GACN`N,NGTC
2464
Sal I
G`TCGA,C
737
BsrD I
GCAATG, 8
2579
Acc I
GT`MK,AC
738
Bsp1286 I
G,DGCH`C
2649
Bgl II
A`GATC,T
743
Rsr II
CG`GWC,CG
2862
PaeR7 I
C`TCGA,G
749
Rsr II
CG`GWC,CG
2862
Xho I
C`TCGA,G
749
BsiC I
TT`CG,AA
3028
Xba I
T`CTAG,A
755
BstB I
TT`CG,AA
3028
Spe I
A`CTAG,T
761
Bsa I
GGTCTC 7/11
3335
Bsp120 I
G`GGCC,C
767
HgiE II
ACCNNNNNNGGT-1/13
3675
Apa I
G,GGCC`C
771
ApaL I
G`TGCA,C
3950
pCMV-N-His质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(815-836): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-N-His的全序列信息:D2737 pCMV-N-His-seq.txt
包装清单:
KL-2737-1μg
pCMV-N-His
1μg
KL-2737-100μg
pCMV-N-His
100μg
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。