pCMV-N-Myc是信裕生物自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达N端和Myc tag (Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的5'端含有一个可以编码Myc标签的序列,因此可以表达出含有Myc标签的融合蛋白,可以方便地使用抗Myc的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-N-Myc质粒的主要信息如下:
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Feature Nucleotide
Position
CMV promoter
1–602
T3 promoter and T3 primer binding site
620–639
Myc tag
679–708
multiple cloning site
711–784
T7 promoter and T7 primer binding site
827–848
SV40 polyA signal
860–1243
f1 origin of ss-DNA replication
1381–1687
bla promoter
1712–1836
SV40 promoter
1856–2194
neomycin/kanamycin resistance ORF
2229–3020
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3021–3479
pUC origin
3608–4275
pCMV-N-Myc质粒的图谱如下:
pCMV-N-Myc的多克隆位点的详细图谱如下:
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Myc tag
SacI M E Q K L I S E E
651
GAGCTCCACC
GCGGTGGCGG
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CCGCC
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ATG
GA
GCAGAAACTC
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ATCTCTGAAG
CTCGAGGTGG
CGCCACCGCC
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GGCGG
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TAC
CT
CGTCTTTGAG
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TAGAGACTTC
XmaI PstI
D L SmaI BamHI HindIII EcoRI EcoRV SalI
701
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AGGATCTG
AG
CCCGGGCGGA
TCCAAGCTTC
TGCAGGAATT
CGATATCGTC
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TCCTAGAC
TC
GGGCCCGCCT
AGGTTCGAAG
ACGTCCTTAA
GCTATAGCAG
BglII XhoI XbaI SpeI ApaI KpnI
751
GACAGATCTC
TCGAGTCTAG
AACTAGTGGG
CCCGGTACCT
TAATTAATTA
CTGTCTAGAG
AGCTCAGATC
TTGATCACCC
GGGCCATGGA
ATTAATTAAT
pCMV-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-Myc)包括:
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Afl II
Age I
Ahd I
Asc I
Bbs I
Bbv II
Blp I
Bsg I
BsiW I
BsmB I
BspM II
BsrG I
BssH II
Bst1107 I
BstE II
Eco47 III
Eco72 I
EcoN I
Esp I
Fse I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
PpuM I
Psp1406 I
Sap I
Sca I
Spl I
Xca I
pCMV-N-Myc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-N-Myc once)包括: