pARE-luc (报告基因质粒)
pARE-luc (报告基因质粒)是信裕生物自行研发的用于检测基于顺式作用元件antioxidant response element(ARE,抗氧化响应元件)的转录活性水平的报告基因质粒。pARE-luc是以信裕生物的pGL6质粒为模板,在其多克隆位点插入了2个ARE结合位点,可以高灵敏度地检测顺式作用元件ARE的激活水平,可以用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态。
pGL6质粒模板是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
pARE-luc质粒的主要信息如下:
ARE response element(ARE RE)
32-77
luc2 reporter gene
123-1775
SV40 late poly(A)signal
1810-2031
SV40 early enhancer/promoter
2079-2497
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor)coding region
2522-3316
Synthetic poly(A)signal
3341-3389
Reporter Vector primer 4(RVprimer4)binding region
3456-3475
ColE1-derived plasmid replication origin
3713
Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region
4504-5364
Synthetic poly(A)signal/transcriptional pause site
5469-5622
Reporter Vector primer 3(RVprimer3)binding region
5571-5590
pARE-luc质粒的图谱如下:
pARE-luc的多克隆位点及ARE response element的详细图谱如下:
BglI KpnI NheI XhoI ARE response element
1
GGCCTAACTG
GCCGGTACCG
CTAGCCTCGA
CCGGATTGAC
CGGCCATGGC
GATCGGAGCT
51
AATCACTGAG
GGTGACTCAG
TCTGCAGAAG
CTTGGCAATC
TTAGTGACTC
CCACTGAGTC
AGACGTCTTC
GAACCGTTAG
pARE-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pARE-luc)包括:
Aat II
Afl II
Asc I
Ase I
Bsa I
BsaA I
BsiW I
BspM II
BssH II
Eco72 I
EcoR I
EcoR V
Mlu I
Nde I
Nru I
PflM I
Pme I
Pml I
Psp1406 I
PspA I
Rsr II
Sac I
Sma I
SnaB I
Spl I
Srf I
Tth111 I
Vsp I
pARE-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pARE-luc once)包括:
Sfi I
GGCCN,NNN`NGGCC
9
EcoN I
CCTNN`N,NNAGG
2997
Bgl I
GCCN,NNN`NGGC
9
BsiC I
TT`CG,AA
3392
Acc65 I
G`GTAC,C
15
BstB I
TT`CG,AA
3392
Asp718
G`GTAC,C
15
Sal I
G`TCGA,C
3406
Kpn I
G,GTAC`C
19
Afl III
A`CRYG,T
3656
Nhe I
G`CTAG,C
21
ApaL I
G`TGCA,C
3970
PaeR7 I
C`TCGA,G
27
HgiE II
ACCNNNNNNGGT -1/13
4235
Xho I
C`TCGA,G
27
Not I
GC`GGCC,GC
4476
Bgl II
A`GATC,T
79
BstX I
CCAN,NNNN`NTGG
4500
Hind III
A`AGCT,T
89
BstE II
G`GTNAC,C
4503
BsrG I
T`GTAC,A
614
Ahd I
GACNN,N`NNGTC
4578
Dra III
CAC,NNN`GTG
1270
Bsu36 I
CC`TNA,GG
4934
Gsu I
CTGGAG 21/19
1503
Pvu I
CG,AT`CG
4948
Bpm I
CTGGAG 22/20
1504
Sac II
CC,GC`GG
4972
Apo I
R`AATT,Y
1886
Bst1107 I
GTA|TAC
5088
Mun I
C`AATT,G
1950
Xca I
GTA|TAC
5088
BamH I
G`GATC,C
2043
Spe I
A`CTAG,T
5407
Stu I
AGG|CCT
2476
BsmB I
CGTCTC 7/11
5420
pARE-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
RVprimer3(5571-5590):
CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
pARE-luc的全序列信息:D2112 pARE-luc-seq.txt
包装清单:
KL-2112-1μg
pARE-luc (报告基因质粒)
1μg
KL-2112-100μg
pARE-luc (报告基因质粒)
100μg/span>
保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经信裕生物书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pARE-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用信裕生物的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。