氧钒核糖核苷复合物(RNase抑制剂)

RNase Inhibitor

RNase Inhibitor (Ribonuclease Inhibitor)，即RNases抑制剂，是一种大肠杆菌重组表达的人胎盘核糖核酸酶抑制剂
(human placental RNase inhibitor)，可以通过非竞争性方式按1:1比例和RNase A、RNase B、RNase C和人胎盘核糖核酸酶(human placental RNase)结合，并抑制这些酶的活性，从而保护RNA不被这些酶降解。
RNase Inhibitor对RNase A、RNase B、RNase C和人胎盘核糖核酸酶的抑制能力极强，其Ki值低至约为4×10^-14M。通常抗体和抗原的亲和常数仅为10^-6-10^-9M。并且RNase Inhibitor和这些RNA酶的结合是非常快速的，几乎在加入的瞬间就会和这
些RNA酶形成复合物从而抑制其酶活性。
RNase Inhibitor不能抑制RNase I、T1、T2、H、U1、U2、CL3、RNase from Aspergillus、S1 Nuclease、Taq DNA
polymerase、M-MLV reverse transcriptase和SP6、T7、T3 RNA polymerase的的酶活性。
RNase Inhibitor在pH 5-8范围内保持其RNA酶抑制活性，在pH 7-8时抑制活性最高。RNase Inhibitor维持其活力需要至少在溶液中含有1mM DTT。
本产品与Thermo公司的RiboLock RNase Inhibitor以及Promega公司的RNasin Ribonuclease Inhibitor属于同类产品，都是重组表达的人胎盘核糖核酸酶抑制剂，对于RNase的抑制效果也完全相同(参考图1和图2)。

氧钒核糖核苷复合物(RNase抑制剂)

氧钒核糖核苷复合物(Ribonucleoside Vanadyl Complexes, RVC)是一种常用的核糖核酸酶(ribonucleases, RNase)抑制剂，即RNA酶抑制剂，浓度为200mM，广泛用于各种RNA样品的分离纯化和检测过程中以抑制RNA降解。
本产品通过一种优化的方法将四种rNTP的等摩尔混合物与氧化钒混合反应而成，可以和RNase以非共价键结合，形成稳定的复合物，从而抑制RNase活性。
本产品是一种常用的RNase抑制剂，可广泛用于各种需要防止RNA降解的RNA分离、纯化和检测过程。本产品可以用于mRNA的纯化过程中，作为RNase的抑制剂；也可用于细胞裂解和蔗糖梯度法细胞组分分离过程中，以抑制RNase活性；还可以用于原位杂交中保护RNA探针，以及DNase I消化DNA时保护RNA等。
本产品可以抑制绝大多数核糖核酸酶，但以下是例外：DNase I、S1 nuclease及Bacillus cereus ribonuclease。由于本产品不抑制DNase I，所以当用DNase I消化去除RNA样品中的DNA时，可以采用本产品来抑制RNase。
本产品不适合用于体外翻译体系。
有报道称0.4mM以上浓度的RVC对PCR聚合酶有一定的抑制作用，所以本试剂不推荐直接用于反转录体系中，反转录体系中可以选用信裕生物的另外一种RNase抑制剂(R0102)。也可以通过后续提到的方法抽提去除RVC后再用于PCR反应。
很多时候RNA样品中的RVC不必去除，可以直接用于后续的电泳、功能检测等。例如，使用本产品纯化获得的mRNA未经去除RVC，可以直接用于蛙卵的注射实验。
如果需要去除RNA样品中的RVC，可以直接使用等体积苯酚进行抽提。如果苯酚中含有抗氧化剂8-羟基(8-
hydroxyquinoline)，抽提含有RVC的RNA样品后会发现苯酚的颜色会变黑。当苯酚抽提样品2-4次后，苯酚的颜色不再明显变色，提示RVC已经被充分去除了。也可以在RNA沉淀前，加入RVC的摩尔数10倍量的EDTA以充分分解和失活RVC，这样可以在RNA沉淀时去除已经分解和失活的RVC。
RVC浓度越高，对于RNase的抑制效果越强。参考图1，20mM的RVC可以完全抑制0.00025U/ml的RNase A。本产品浓度为200mM，一般细胞裂解液中推荐使用终浓度20mM，也可以根据经验或文献选择不同的浓度。每一批的本产品都经过RNase活性抑制的检测，检测结果参考图1。

图1. 不同浓度的RVC对RNase A的抑制效果图。总RNA和0.00025U/ml RNase A以及指定浓度的RVC一起孵育20分钟后进行电泳检测。本图仅作参考，不同的样品不同的检测条件，实际获得的结果可能和上图有所差别。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事项：
次使用时建议分装，避免反复冻融。
去垢剂SDS以及螯合剂EDTA可以抑制RVC的活性，请勿和RVC同时使用。 
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

图1. 信裕生物的RNase Inhibitor和同类产品(Competitor RNase Inhibitor)对RNase A酶活性的抑制效果比较。5μg yeast RNA与0或2ng RNase A及8、4、2、1或0U RNase Inhibitor，在100μl的反应体系(50mM MOPS, 5mM MgCl₂, pH6.5)中，37℃孵育15分钟。反应完毕后立即取20μl反应液用1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。

图2. 信裕生物的RNase Inhibitor和同类产品(Competitor RNase Inhibitor)对RNase A的酶活性的抑制效果比较。2μg Hela细胞总RNA与0或0.5ng RNase A及20、10、5、2.5、1.25、0.625或0U RNase Inhibitor，在20μl的反应体系(50mM MOPS, 5mM MgCl₂, pH6.5)中，37℃孵育15分钟。反应完毕后立即全部用1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。

用途：用于cDNA合成，体外转录，体外翻译，以及mRNA-protein复合物分离纯化等过程中保护RNA不被降解；还可用于特定RNase活性的鉴定等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为human placenta中编码该酶的基因。
分子量：约49.6 kDa(单体)。
活性定义：将能够抑制5ng RNase A的50%活性的酶量定义为一个活性单位。
活性检测条件：100mM Tris-HCl (pH7.5), 1.2mM EDTA, 0.1mg/ml BSA, 100ng/ml RNase A, 0.1mg/ml E.coli [3H]-
RNA, 50mg/ml yeast RNA, 8mM DTT。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶。
储存溶液：20mM HEPES-NaOH (pH7.5), 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制：75℃加热10分钟可以导致完全失活。70℃加热10分钟仍会有微量活性残留。SDS和尿素等导致蛋白变性的试剂
以及对氯汞基苯甲酸盐(p-chloromercuribenzoate)、等氧化剂会抑制RNase Inhibitor与RNA酶的结合。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
酶储存溶液中加入DTT可保证RNase Inhibitor长期贮存的稳定性。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 对于cDNA合成、体外转录、体外翻译等常见的反应体系中，为保护其中的RNA不被RNase降解，RNase Inhibitor推荐用量为最终浓度1-2U/μl。