生物素随机引物DNA标记试剂盒

生物素随机引物DNA标记试剂盒

生物素随机引物DNA标记试剂盒(Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3'-5'exo-)催化下，通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中，这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中，一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下，通过随机引物标记反应，最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针，可多达1-15倍左右。
本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记，包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp，小于100bp的DNA模板可以使用信裕生物生产的生物素3'末端DNA标记试剂盒(D3106)进行DNA探针标记。
用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng，推荐的模板用量为100ng-1μg。
本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA，可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。
生物素标记DNA可以使用信裕生物生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当试剂盒进行检测。
本试剂盒可以用于10个标记反应。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
需自备用于探针标记效率检测的相关试剂。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
 

使用说明：
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μl。
说明：通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表：

11. 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用信裕生物生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：

注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp，平均长度约为300bp左右。