NA-Green (EB升级换代产品, 2000X)

NA-Green (EB升级换代产品, 2000X)

信裕生物的NA-Green (Nucleic Acid Green，核酸绿)是一种EB (Ethidium bromide，溴化乙锭)的升级换代产品，用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。NA-Green具有安全(未检测到致突变性和细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点，凝胶中的核酸在使用本产品后经约500nm波长蓝光(也可以使用约260nm紫外光)激发呈现绿色荧光，适用于原先使用SYBR Green或SYBR Gold为核酸染料的凝胶成像和检测系统。
由于NA-Green在500nm左右处有的激发波长，可以使用对人体无害的蓝光灯或蓝光成像仪进行核酸检测，从而避免常规的紫外检测对核酸样品的致突变性，以及紫外对人的眼睛和皮肤的伤害。特别在切胶回收时，使用NA-Green并用蓝光灯具有很大的优势，不仅可以避免核酸样品的突变，也可以避免紫外光对人体的伤害。
NA-Green比EB或SYBR Green更安全。NA-Green在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明，即使在S9代谢活化时，也没有检测到致突变性。NA-Green和信裕生物另外一种安全型核酸染料NA-Red，由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞，从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。艾姆斯氏试验结果表明，NA-Green比NA-Red更安全，即便在S9代谢活化时，当NA-Green浓度高达约20微克/毫升时，也没有检测到致突变性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜，进入活细胞并染色DNA。并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。
NA-Green检测灵敏度高，对于小分子量核酸的染色效果好。NA-Green的检测灵敏度比EB高8-10倍，在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳，尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时，NA-Green和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高；与SYBR Gold不同的是，NA-Green预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸染色效果差，而NA-Green对于小分子量核酸的染色效果很好，便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。本说明书推荐使用的NA-Green浓度，其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度，可以适当提高NA-Green的工作浓度。
NA-Green的稳定性好，染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差，这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而NA-Green的稳定性很好，可以室温长时间保存及使用微波炉加热。NA-Green的光稳定性良好，可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性，含NA-Green的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。
NA-Green可以使用和SYBR Green或EB相同的检测体系。NA-Green具有和SYBR Green或SYBR Gold几乎相同的光学性质，两者的激发光和发射光都非常接近，这样可以直接用NA-Green替换SYBR Green，以使用SYBR Green的凝胶观察、拍照或成像系统(约500nm激发)。对于原来用于EB染料观察的系统，可以考虑选用信裕生物的NA-Red染料来替代EB，但也可以使用没有致突变性的NA-Green来替代EB。使用NA-Green来替代EB，并且用EB的紫外检测体系时，检测灵敏度会比使用NA-Red低约4-5倍。对于既可以观察EB也可以观察SYBR Green的具有紫外和蓝光两种激发光的凝胶成像系统，则推荐直接用NA-Green来替换EB。NA-Green的激发光谱和发射光谱请参考图1。

图1. NA-Green的激发光谱和发射光谱

NA-Green的使用方法和EB一致。NA-Green可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶，也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便，而后者灵敏度要更加高一些。但由于NA-Green本身已经非常灵敏，通常采用把NA-Green直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊的情况，如核酸样品量特别少的情况等，则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
NA-Green对于核酸的迁移率影响非常小，小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。
通过凝胶回收试剂盒(如信裕生物或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提，可以有效去除与DNA或RNA结合的NA-Green，从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。
包装清单：

保存条件：
室温避光保存，至少一年有效。
注意事项：
为确保使用的不是假冒的NA-Green，可以用细胞培养液把NA-Green稀释至1X，然后对培养的活细胞进行染色。随后在荧光显微镜下尝试用各种激发光观察，如果发现活细胞细胞核出现明显的荧光，则可以判定为假冒产品。如果各种激发光下活细胞均无荧光，则说明该核酸染料是不能进入活细胞的相对安全的染料。具有强致突变性的吖啶橙(Acridine Orange)染色核酸后也呈现绿色荧光，但其可以染色活细胞，而NA-Green不会染色活细胞。
使用蓝光灯来检测NA-Green染色的核酸胶时，需要注意避免使用一些实为紫外灯的假冒伪劣的蓝光灯，以减少紫外线对于核酸样品和人体的伤害。比较简单的判断方法是，对于EB或NA-Red染色的核酸胶，蓝光灯照射后是不会出现荧光条带的，而仅对于NA-Green染色的核酸胶，蓝光灯照射后才会出现荧光条带。如果对于EB或NA-Red染色的核酸胶照射后也能观察到荧光条带，则说明使用的蓝光灯实际为紫外灯。
NA-Green和EB一样作为荧光染料均需避光保存，但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果。
制备好的NA-Green琼脂糖凝胶，在4℃避光条件下通常可以保存3-5天。
NA-Green琼脂糖凝胶再次熔化使用时，为取得更好的观察效果，需要添加适量NA-Green。
电泳之后的凝胶不建议重复使用。
电泳后再使用NA-Green染色的凝胶一般不需要脱色，如果发现背景太高，可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
NA-Green和NA-Red除了可以染色双链DNA外，也可染色单链DNA和RNA。NA-Red对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。NA-Red对单链核酸的染色灵敏度约为NA-Green的5倍。
如果使用聚凝胶，请使用浸泡染色法染胶，并延长染色时间至30分钟-1小时。
如果观察到条带弥散或者分离不理想，建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题，说明与染料无关，请尝试以下方法：使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。
本产品兼容常用的电泳缓冲液，例如TAE和TBE。
NA-Green适用于约500nm或260nm激发的成像系统，如果使用普通的适用于NA-Red或EB的紫外灯或成像系统(约300nm激发)，也能较好地观察到荧光，但强度会略弱一些。
NA-Green不属于有毒有害物质，并通过了环境安全相关测试，相关废弃物无需特殊处理，可参考常规化学试剂进行处理。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
NA-Green和EB(溴化乙锭)一样可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种： 
1. 琼脂糖凝胶中添加NA-Green。
根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后，适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时，按照每100毫升胶液加入50微升NA-Green的比例(2000:1)加入NA-Green。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适当量的DNA或RNA在该胶中电泳后，用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)，就可以观察到明亮的核酸条带。说明：NA-Green非常稳定，所以NA-Green可以像EB一样在琼脂糖凝胶液加热融解后但未凝固前加入并混匀，也可以在琼脂糖融解前加入然后再微波炉加热融解并混匀。
2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色。
按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入100-200微升NA-Green的比例(500-1000:1)加入NA-Green，配制成NA-Green染色液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中，加入适量上述配制好的NA-Green染色液，确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(30-50rpm)染色20-30分钟。染色的时间根据胶的厚度而定，胶厚则染色时间需要长一些，胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后，在紫外灯下即可观察核酸条带。要观察到更为清晰的条带，可以在染色后用水漂洗1-2次，每次3-5分钟，以消除背景，然后用约500nm波长蓝光激发或相应的凝胶成像系统检测(也可以使用常规的紫外灯或紫外凝胶成像检测系统)。NA-Green染色液可以重复使用3次左右。NA-Green染色液也可以一次大量制备，在室温下避光保存，直至用完。对于核酸需要回收的情况，操作过程中需要注意避免核酸酶污染。