一步法鼠基因型鉴定试剂盒

一步法鼠基因型鉴定试剂盒

信裕生物生产的一步法鼠基因型鉴定试剂盒，即One-step genotyping assay kit for rodents，是一种特别便捷的使用鼠血样品一步法直接进行PCR，从而实现鼠基因型快速鉴定的试剂盒。无须抽提基因组DNA，血液样品可以直接用于PCR。并且PCR结束后可以直接上样电泳，无需添加上样缓冲液。
本试剂盒采用了耐血的HemoTaq™ DNA聚合酶，这是一种经过基因工程改造的非常高效的适用于EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血样品或干血斑样品直接PCR检测的耐热DNA聚合酶，确保了本试剂盒可以快速便捷地用于鼠基因型鉴定。
对于全血样品可以直接PCR检测，无须提取DNA。本产品对小鼠、大鼠等全血中血红素等各种PCR抑制剂表现出超强的抗性，对于新鲜采集的、4℃保存或低温冻存EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝的人或小鼠血液样品或者干血斑(如whatman903或FTA采血卡上的干血斑)，都无需进行DNA提取纯化，可以直接用于PCR扩增目的DNA。
所需血样少，耐血能力高。本产品用于20μl的PCR扩增体系时，通常仅加入约1μl抗凝全血即可顺利完成PCR检测。20μl的PCR扩增体系中加入的血液量可以达到4μl，即20%体积，但通常建议使用1μl血液样品。
兼容EDTA、肝素或柠檬酸钠三种常见抗凝血。血液样品用于PCR检测时，EDTA、肝素或柠檬酸钠抗凝血都可以兼容的。如果希望取得的检测效果，优先推荐EDTA抗凝血。因为EDTA可以螯合多种核酸酶发挥酶活性所必须的金属离子，从而可以更好地抑制核酸的降解。
本试剂盒提供了一对阳性对照引物，便于确认PCR检测效果。该对引物是一种小鼠、大鼠和人的通用引物，可以扩增小鼠、大鼠或人基因组DNA中β-actin基因的300bp DNA片段。
本产品的耐血体积百分比可以达到20-50%，但推荐血液用量为5%。本产品用于肝素、柠檬酸钠和EDTA抗凝血PCR检测的效果参考图1。图中可见，本产品对肝素(heparin)、柠檬酸钠和EDTA处理的全血的耐受体积百分比可以达到50%、20%和30%。尽管本产品有很好的耐血效果，实际使用时先的推荐血液用量为5%。实际使用时，可能会因为高血脂等异常血液，导致血液用量加大，从而会存在PCR效果下降的风险。
图1. 信裕生物生产的一步法鼠基因型鉴定试剂盒扩增图中所示不同抗凝剂采集的抗凝全血中目的基因的电泳效果图。使用一步法鼠基因型鉴定试剂盒及本试剂盒提供的Control primer mix，在PCR体系中直接加入5-50%不同体积百分比的不同抗凝剂采集的抗凝血，用于扩增-actin基因的300bp DNA片段后的电泳效果图。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands))。
本产品中含有的HemoTaq™ DNA Polymerase (Blood-resistant)的保真性和Taq DNA聚合酶相近，因此本产品建议主要用于血液检测目的。如果目的是为了克隆特定基因，推荐使用D7243S/M HemoTaq™ HF DNA Polymerase (Blood-resistant)或者D7287S/M Easy-Load™ Blood Direct PCR Master Mix (HF, 2X)。
本产品可以轻松扩增长达5kb的目的片段。本产品可以轻松扩增长达5kb的目的片段。本产品扩增不同长度目的基因的效果参考图2。图中可见，本产品以柠檬酸钠抗凝全血为模板可以直接PCR扩增出长达5kb的DNA片段。
图2. 信裕生物生产的一步法鼠基因型鉴定试剂盒直接以10%柠檬酸钠抗凝全血为模板扩增不同长度的目的基因的效果图。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands)); 1,β-actin (300bp); 2, CCR5 (630bp); 3, CCR5 (1100bp); 4, CCR5 (2000bp); 5, IL-6 (2841bp); 6, IL-6 (4171bp); 7, IL-6 (4882bp)。
本产品扩增获得的PCR产物带有3'-dA overhangs的粘性末端，可直接用于和T载体连接进行TA克隆。
本产品如果用于20微升的PCR反应体系，两种包装的本产品分别足够用于100个和500个反应。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。适当避免反复冻融。
注意事项：
由于PCR反应非常灵敏，在使用一步法鼠基因型鉴定试剂盒时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5%左右，可以直接添加到PCR体系中，无需进行任何额外处理。
PCR反应结束之后，建议3000-5000g离心3-5min以沉淀血细胞碎片，便于吸取上清用于电泳分析等。注意：由于抗凝血本身的原因，PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质，此为正常现象。
需自备Nuclease-Free Water。推荐选购信裕生物生产的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。