RNase H

RNase H

RNase H，即Ribonuclease H，中文名为核糖核酸酶H，是一种核糖核酸内切酶，可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键，即不能消化单链或双链DNA或RNA。
      特点：特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA，常用于cDNA第二链的合成。
      用途：DNA-RNA杂合链中去除RNA，例如cDNA第二条链合成前去除mRNA；通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切；除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
      来源：E.coli MRE-600细胞。
      分子量：约18.4kDa(单体)。
      活性定义：37℃20分钟内，能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
      活性检测条件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl₂，1mM DTT，24μM[³H]-poly(A).poly(dT)，
0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
      纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
      酶储存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
      Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl₂，10mM DTT。
      失活或抑制：65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
包装清单：

保存条件：
      -20℃保存。
注意事项： 
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明：
1. DNA-RNA杂合链中去除RNA：
a. 用反转录酶，例如BeyoRT M-MuLV反转录酶或BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂：

c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
说明：其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成：
a. 用反转录酶，例如BeyoRT M-MuLV反转录酶(D7153)、BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(D7159)或BeyoRT cDNA链合成试剂盒(RNase H-)(D7166)合成cDNA条链，70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂：

c. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意：反应温度不能超过15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀，以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
注：Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。