Thermolabile dsDNase

Thermolabile dsDNase

信裕生物生产的Thermolabile dsDNase，即热敏感性双链脱氧核糖核酸酶，是一种用于快速、安全地去除RNA样品中基因组DNA(genomic DNA, gDNA)污染的重组表达的热敏感性双链脱氧核糖核酸酶。本产品可特异性剪切双链DNA(double strand DNA, dsDNA)中的磷酸二酯键，产生带有5’-磷酸与3’-羟基末端的寡核苷酸的核酸内切酶。
本产品对RNA或单链DNA如cDNA和引物几乎无酶切活性，在镁离子存在的情况下，本产品对dsDNA的酶切活性比对ssDNA的酶切活性约高5000倍。并且本产品55℃加热5分钟即可被失活，因此非常适合用于在反转录之前快速便捷地去除RNA样品中的基因组DNA污染。
本产品在20-40℃保持高活性状态，比牛DNase I的活力约高30倍，但可通过55℃热处理5分钟而完全且不可逆地灭活。
特点：dsDNA特异性，特异性消化双链DNA而对单链DNA及RNA无活性；热不稳定性，使用相对温和的55℃加热处理5分钟可使Thermolabile dsDNase不可逆失活；活性强，2分钟孵育即可将RNA样品中所含有的基因组DNA或1μg基因组DNA消化完毕(参靠图1)。

图1. 信裕生物生产的Thermolabile dsDNase的特异性及热敏感性检测效果图。A. 信裕生物生产的Thermolabile dsDNase、同类产品(Competitor dsDNase)及DNase I (D7073)消化400bp双链DNA (dsDNA)或45nt单链DNA (ssDNA)的效果对比图。反应体系均为10μl，dsDNA与ssDNA总量均为400ng，反应条件为37°C孵育2min。图中可见Thermolabile dsDNase特异性消化dsDNA，而对ssDNA无活性，DNase I对于dsDNA和ssDNA没有选择性。B. 55℃孵育5min可使Thermolabile dsDNase完全失活。400ng长度约400bp的PCR产物，加入Thermolabile dsDNase后37℃孵育2min，或者先55℃孵育5min后再37℃孵育2min。

用途：制备不含DNA的RNA样品；反转录前RNA样品中去除基因组DNA污染；体外T3、T7、SP6等RNA Polymerases催化的RNA合成后消化去除模板DNA。
来源：Pichia pastoris重组表达Thermolabile dsDNase基因。
分子量：43kDa
纯度：不含其它DNA内切酶与外切酶活性，不含RNA酶活性。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl (pH7.5)，2mM MgCl₂，10mM NaCl，0.01%(v/v) Triton X-100，50%(v/v) glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl (pH8.3)，60mM MgCl₂。
失活或抑制：55℃加热5min可使Thermolabile dsDNase完全失活；金属离子螯合剂如EDTA、毫摩尔浓度的锌等金属离子、低于0.1%的SDS、高盐以及还原剂如DTT和巯基乙醇均可抑制Thermolabile dsDNase的酶活性。
包装清单：

保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
本产品用于反转录反应前RNA样品中去除基因组DNA污染时，必须注意RNase-free的相关操作规范。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：
1. 使用本产品推荐反应体系为10μl。待处理的RNA样品中依次加入1μl的Thermolabile dsDNase和1μl Reaction Buffer (10X)，补充RNase-free water至10μl，混匀后置于37℃水浴孵育2min，即可有效去除RNA样品中的基因组DNA污染或DNA模板等双链DNA。
2. 经过Thermolabile dsDNase处理的RNA样品，后续如果用于反转录，必须在55℃加热5min以充分灭活Thermolabile dsDNase。尽管Thermolabile dsDNase不会消化单链DNA，但单链的cDNA形成复杂的二级结构中含有双链时，还是有可能被Thermolabile dsDNase所识别并剪切的，因此在反转录前必须在55℃加热5min以充分灭活Thermolabile dsDNase。