E64

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细胞氧化应激的定量评价方法大致分做三类：

1）测定由活性氧修饰的化合物；

2）测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量；

3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。

进一步尚有：

1）生物体内氧化应激的程度足以产生应答；

2）活体内难以蓄积；

3）在活体内不是被代谢，而是稳定存在，等等。理解这些要点对于临床普及推广都很有用。

细胞增殖-毒性检测实验操作步骤
是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。下面以engreen的CCK8试剂盒为例，简要说明细胞增殖-毒性检测的操作步骤
方法/步骤
在96孔板中配制100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃，5% CO2 的条件下)。
向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
向每孔加入 10μl CCK8 溶液（engreen） (注意不要在孔中生成气泡，它们会影响 OD 值的读数)。
5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加10μl0.1 M HCl溶液或者1%wSDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化 。

细胞周期检测的原理：

PI法是经典的周期检测方法。PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。

常用的细胞染色方法有:

1.简单染色法,常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;

2.革兰氏染色法,主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程;

3.瑞氏染色法,瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;

4.吉姆萨染色法,吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;

5.细胞免疫荧光染色法,免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。

蛋白提取/定量

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