动植物总蛋白微量提取试剂盒

动植物总蛋白微量提取试剂盒

产品及特点

本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于 SDS-PAGE 凝胶电泳和 Western

印迹分析以及蛋白活性测定等。本产品的其主要特点是：

1. 提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。

2. 采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。

3. 适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。

4. 得到的提取物可以直接用于 SDS-PAGE、2D 电泳、Western 印迹分析以及

蛋白活性测定等下游实验。

5. 一次可以处理 100mg 左右的样品，足够进行几十次 SDS-PAGE mini 胶电泳

检测。

运输及保存 常温运输和保存，但收到货后 5×SDS-PAGE 上样液需-20℃保存，频繁使用时可

以放 4℃保存，产品有效期为出厂后一年。

使用方法

使用前，好请在动植物总蛋白微量提取溶液 A 中加入自备的、新鲜配制的 1M

DTT 溶液 50uL。

一：匀浆法

注意：对致密的实体组织（如肌肉），好用 Polytron 剪切式匀浆机匀浆处理。

1. 称取动物或植物组织样品 100 mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到 10-15 mL 的塑料离心管中。

2. 加入 1mL 动植物总蛋白微量提取溶液 A，在冰上用 Polytron 剪切式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。

3. 将匀浆液全部转移到 1.5 mL 的塑料离心管中。

4. 4℃ 12,000 g 离心 10 分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

5. 将上清液转移至一新的 1.5 mL 塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行 SDS-PAGE 电泳，可取部分到离心管中，加入 5×SDS-PAGE 上样缓冲液使其终浓度为 1×（加入样品体积的 1/4 即可，40uL 样品加入 10uL 5×SDS-PAGE 上样缓冲液），在沸水中水浴 5 分钟后立即上样电泳。

二：直接研磨法

注意：可以使用玻璃和陶瓷的研钵，也可以使用与微量离心管式的研磨杵

1. 称取动物或植物组织样品 100 mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到预冷的研钵或离心管中。

2. 加入 1mL 动植物总蛋白微量提取溶液 A，用研磨杵研磨，直到没有肉眼可见的组织块。

3. 将匀浆液全部转移到 1.5 mL 的塑料离心管中。

4. 4℃ 12,000g 离心 10 分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

5. 将上清液转移至一新的 1.5 mL 塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行 SDS-PAGE 电泳，可取部分到离心管中，加入 5×SDS-PAGE 上样缓冲液使其终浓度为 1×（加入样品体积的 1/4 即可，40uL 样品加入 10uL 5×SDS-PAGE 上样缓冲液），在沸水中水浴 5 分

钟后立即上样电泳。

三：液氮研磨法

注意：好使用玻璃和陶瓷的研钵

1. 取大约 100 mg 动物或植物组织样品，转移到预冷的研钵中。

2. 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。

3. 加入 1mL 动植物总蛋白微量提取溶液 A 溶解，然后将溶液全部转移到 1.5 mL的塑料离心管中。

4. 4℃ 12,000 g 离心 10 分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。

5. 将上清液转移至一新的 1.5 mL 塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行 SDS-PAGE 电泳，可取部分到离心管中，加入 5×SDS-PAGE 上样缓冲液使其终浓度为 1×（加入样品体积的 1/4 即可，40uL 样品加入 10uL 5×SDS-PAGE 上样缓冲液），在沸水中水浴 5 分

钟后立即上样电泳。

注意：

1．如果 4℃ 12,000 g 离心 10 分钟后得到的上清液中还有可见的沉淀，可以将上清转移到一个新的离心管中后再 4℃ 12,000 g 离心 10 分钟，以去除可见的小碎片。

2．植物组织中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代谢产物，如果需要除去植物蛋白样品中残存的色素等杂质，可以在后得到的上清液中加入 5倍体积的冷丙酮或冷甲醇，混匀后-20℃放置 1 小时或过夜，然后 4℃12,000 rpm 离心 10 min，弃上清后室温风干 3-5 分钟，然后将样品溶于自备的后续实验缓冲液中即可。经过此纯化处理后，部分蛋白质可能会发生变性，不能再用于活性检测。