动物细胞裂解液（变性法）

动物细胞裂解液（变性法）

产品及特点本产品含有多种细胞裂解成分和蛋白酶抑制成分，可以在非变性或变性条件下迅速裂解组织或培养细胞，使之释放出细胞内蛋白，用于后续实验。

它具有以下优点：

1. 快速裂解，多种裂解成分经过精心优化，能快速使细胞裂解。

2. 非变性（80807A）产品能大程度地保留蛋白天然结构和功能，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀，还可以用于蛋白活性检测（信号传递研究和酶动力学检测）和 Western Blot 等各种后续实验。

3. 变性（80807B）裂解细胞的效率更高，主要用于对抗原空间构型不敏感的免疫共沉淀实验，还可以用于 Western Blotting。

4. 适用于培养细胞（包括悬浮细胞）和新鲜组织。
规格及成分 成 份 编 号塑料瓶包装塑料瓶包装
动物细胞裂解液（非变性） LM80807A 250 mL -
动物细胞裂解液（变性） LM80807B - 250 mL
使用手册 LM80807sc 1 份 1 份

运输及保存 常温运输、4℃保存，有效期一年。

自备试剂 PBS 缓冲液

使用方法 注意事项

1、 如果在本产品中额外再加入终浓度为 1×的、新鲜配制的蛋白酶抑制剂复

合物，可以更有效地抑制蛋白酶活性，防止蛋白降解。

2、 如果用于信号传递研究，好在本产品中加入终浓度为 1×的、新鲜配制

的磷酸酶抑制剂复合物。

3、 整个裂解步骤都要在冰浴或 4℃操作。本产品和 PBS 均需预先冷却。

4、 本产品所含有较高浓度的去垢剂会对 Bradford 蛋白浓度测定有较大影

响，因此只能使用 BC

3、 按每 106个细胞加入 0.1 mL 本产品（或 100mm 贴壁细胞加 1mL 本产

品）的比例向培养板中加入适量的本产品（按此比例裂解得到的裂解物

的蛋白浓度约在 5-10 mg/mL 之间）。

注意：裂解效率跟细胞数量和本产品用量的比例密切相关。一般情况下 6

孔板的单孔(1～2×106细胞)需要 0.1~0.2 mL 本产品；25 cm2培养瓶

(3～6×106 细胞)需要 0.3~0.6 mL；75 cm2 培养瓶(1～2×107 细胞)

需要 1~2 mL。对于特别大或特别小的细胞，需要用户摸索佳用量。

4、 冰上放置 10-30 分钟（佳时间跟细胞系相关），其间偶尔轻轻摇晃或用

枪头轻轻吹打。

5、 将细胞培养板倾斜使上清液汇集在一端，并将其全部转移到一个新的 1.5

mL 塑料离心管中。

6、 15,000×g，4℃离心 10 分钟，将上清转移到一个新的 1.5 mL 塑料离

心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，

好新鲜使用。

7、 使用前好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western

或免疫沉淀操作。

二：处理悬浮细胞

1、 400×g，4℃离心 10 分钟收集悬浮细胞，弃上清。

2、 用等体积的预冷 PBS 洗涤细胞沉淀两遍，步骤同一步。

3、 按每 106个细胞加入 0.1 mL 本产品的比例加入本产品，充分悬浮细胞。

4、 冰上放置 15 分钟裂解细胞，期间偶尔轻柔震荡。

5、 15,000×g，4℃离心 10 分钟，将上清转移到一个新的 1.5 mL 塑料离

心管中。为避免吸取到细胞沉淀，好留 20-40uL 液体不取。

6、 将上清液放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，

好新鲜使用。

7、 使用前好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western

或免疫沉淀操作。

三：处理组织块

1、 称量组织块，用毛玻片或玻璃匀浆器研磨或匀浆，用 5-10 倍体积的、预冷的 PBS 洗两次(包括冲洗器材)。

2、 将匀浆物转移到离心管中，1500g、4℃离心 5 分钟后弃上清。

3、 按每 50 mg 组织加入 0.2 mL 本产品的比例加入预冷的本产品，吹打混匀，放置冰上。

4、 每隔 5 分钟振荡器轻柔振荡一次，共 4 次。

5、 15,000×g、4℃离心 10 分钟，将上清转移到一个新的 1.5 mL 塑料心管中，放置在冰上待用或放-80℃长期保存。注意：如果用于免疫沉淀，好新鲜使用。

6、 使用前好先测定上清液的蛋白浓度，然后再进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。