动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

动物胞浆蛋白微量制备试剂盒

产品及特点 DNA 只存在于细胞核内，因此参与转录调节和 DNA 复制的蛋白质主要存在于细胞核中，要研究蛋白质与 DNA 的相互作用，首先需要制备能够与 DNA 作用的天然细胞核蛋白质。目前、细胞核蛋白质制备方法一般都比较繁琐，一次处理大量样品时尤其不便，为此本公司开发了本产品，用于从哺乳动物组织和培养细胞核蛋白的微量提取，它具有下列特点：
1. 提取制备过程简便，只需要一小时。
2. 实验重复性好，尤其适合同时处理多个样品。
3. 可用于培养的动物细胞，也可以用于组织细胞。
4. 制备的核蛋白能保持天然活性，可以直接用于转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、DNA 足迹图实验和甲基化干扰实验酶活性测定等研究。
运输及保存 低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂 PBS 缓冲液，PMSF 溶液，DTT 溶液

使用方法 1、 对贴壁细胞：将 5×105-7 个细胞培养到覆盖率为 55-65%，吸弃培养基，用自备的预冷 PBS 缓冲液洗涤细胞一次，将细胞从壁上小心刮下，转移到预冷的塑料离心管中，4℃ 3000 rpm 离心 5 分钟，小心弃上清。直接进入第三步进行后续处理。
2、 对悬浮细胞：直接将 5×105-7 个的悬浮细胞转移到 1.5 mL 预冷的塑料离心管中，4℃ 3000 rpm 离心 5 分钟，用自备的预冷的 PBS 洗涤细胞沉淀一次，3000 rpm 离心 5 分钟，小心弃上清。直接进入第三步处理细胞沉淀。说明：悬浮细胞制备胞浆的效果一般好于贴壁细胞。
3、 在细胞沉淀中加入相当于沉淀细胞体积 5 倍或更多的预冷的溶液 A 重悬细胞，一般不超过 300 uL-500 uL 溶液 A。溶液 A 在临用前好加入终浓度为 0.2mM 的 PMSF 和 1mM 的 DTT。PMSF 和 DTT 在水溶液中都不稳定，只能临用提加入。
4、 冰浴静置 10 分钟。
5、 将细胞转移到预冷的 15 mL 的 Dounce 或 Potter 玻璃匀浆器中（温和破裂细胞用），上下匀浆 10-15 次（为检查效果，可取少量裂解物与自备的 0.01%Trypan Blue 溶液混合，在显微镜下观察，只有破裂细胞的细胞核才能染色，完整细胞无色。如果需要，可增加匀浆次数直到 80-90%以上的细胞裂解为止 ）。
6、 小心转移到预冷的离心管中，4℃ 17000g 离心 15 分钟，线粒体，细胞核等细胞器将沉淀到管底。保留上清（胞浆部分）待用。