大肠杆菌TG1化学感受态细胞

大肠杆菌TG1化学感受态细胞

产品及特点本产品是采用大肠杆菌 TG1 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可直接用于 DNA 的化学转化。

本试剂盒具有下列特点：

1. 使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，-80℃保存几个月转化效率不改变。

2. 可用于高效转化 150Kb 大小的质粒，可用于蓝白斑筛选。

3. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

号及其含义列表如下：

基因型符号 含义

K-12

K-12系的所有菌种默认都携带F因子和?、e14、rac

三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，

其产物可对甲基化的CG切割。

F'[traD36

proAB+ lacI

q

lacZΔM

15]

本菌株携带的F因子上还携带下列染色体基因：突变

的traD36基因，使菌株能够发生结合但F因子转移

能力丧失；野生型proAB

+使菌株可以合成脯氨酸；

突变的lacI

q使得lac抑制蛋白过表达，降低lac启动

子的背景表达； lacZ△M15的?-半乳糖苷酶基因

可与携带?片段的质粒互补恢复酶活性，用于蓝白斑

筛选

△(lac-proAB )

缺失lac操纵子和脯氨酸合成基因，不能合成?-半乳糖苷酶和脯氨酸hsd△5

EcoK系统的甲基化酶失活，不会甲基化Eco位点的AsupE

同glnV，使得终止子UAG编码谷氨酰胺，减轻UAG

突变（琥珀突变）的伤害

thi-1 不能合成硫氨（维生素B1）

规格及成分 成分 编号 小扁盒包装

大肠杆菌 TG1 化学感受态细胞 LM80701 0.1 mL×10

使用手册 LM80701sc 1 份

4. 大肠杆菌 TG1 菌株基因型是 K-12, supE,thi-1,Δ(lac-proAB), Δ(mcrB-hsdSM)5, (rK -mK - ), F' [traD36 proAB+ lacI q lacZΔM15]。
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装 
大肠杆菌 TG1 化学感受态细胞 80701 0.1 mL×10
使用手册 80701sc 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。