大肠杆菌SURE化学感受态细胞

大肠杆菌SURE化学感受态细胞

产品及特点本产品是采用大肠杆菌 SURE 菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可直接用 于 DNA 的化学转化。

本试剂盒具有下列特点：

1. 使用 pUC19 质粒检测，转化效率可达 108，-80℃保存几个月转化效率不改变。

2. 主要用于克隆不稳定的 DNA 片段，如重复序列、Z-DNA 等。

3. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

4. 大肠杆菌SURE菌株基因型是K-12,e14-(mcrA-), Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171, endA1, gyrA96, thi-1, supE44, relA1, lac, recB, recJ, sbcC, umuC::Tn5 

(Kanr), uvrC。其基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号 含义

K-12 本菌种属于K-12系，本系所有菌种都携 带F因子和?、e14、rac三种原噬菌体。

[F′ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)] 本菌种的 F 因子还携带 proAB lacIqZΔM15 Tn10。其中野生型的 proAB 可合成脯氨酸；lacI q使 lacI 抑 制蛋白过表达，对 lac 启动子的抑制加 强，降低背景表达；又叫 lacZ△M15， 编码?-半乳糖苷酶基因?片段，与携带? 片段的质粒互补可恢复酶活性，用于蓝 白斑筛选； Tn10 转座子带四环素抗性

e14- (mcrA - ) 本菌种的 e14 原噬菌体缺失，故其携带 的mcrA基因也缺失，丧失对甲基化CG 的切割

endA1 缺失核酸内切酶 I

gyrA96 DNA促旋酶突变，导致对萘啶酮酸和荧 光喹啉的抗性 lac 染色体缺失lac操纵子 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 缺失对甲基化C的限制、缺失EcoK修饰 限制系统，缺失对甲基化A的限制 recB recBCD重组系统的重组辅助酶ExoV 失活，重组和损伤修功能复 recJ 重组缺失，降低质粒间的重组 relA1 戒严反应缺失，RNA合成可以在蛋白合 成停止后继续进行 sbcC RecF重组途径突变，有利于扩增携带回 文结构的噬菌体和质粒 supE44 使琥珀终止子编码谷氨酰胺，为某些质 粒和噬菌体生长所需 thi-1 不能合成硫氨（维生素B1） umuC::Tn5 SOS修复突变，增加回文结构稳定性。 携带的Tn5转座子带卡拉霉素抗性 uvrC UV修复缺失，增加回文结构稳定性
规格及成分 成分 编号 小扁盒包装
大肠杆菌 SURE 化学感受态细胞 LM90208 0.1 mL×10
使用手册 LM90208sc 1 份

运输及保存 干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂 目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法

1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根 据实际情况分装使用。 以下实验以 50 μl 感受态细胞为例。

2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的 DNA（根据实际情况加入适 量的 DNA，通常 100 μl 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和），用 移液器轻轻吹打混匀，冰浴 30 分钟。

3. 42℃热击 90 秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置 2-3 分钟。

4. 每个离心管中加入 450 μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基（不含抗生素），混匀后置于 37℃摇床，150 rpm 振荡培养 45 分钟使菌体复苏。

5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的 SOC 或 LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于 37℃直至液体 被吸收，倒置培养，37℃培养 12-16 小时。

注意：

1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的 DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布 平板；若转化的 DNA 总量较少，可取 200-300 μl 转化产物涂布平板。若预计的 克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm ，2 分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体 后将其涂布于平板中。

2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培 养。

3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液 再涂布新培养基进行培养。